使用光譜儀器時(shí)，如何巧妙制樣,？

針對(duì)不同的樣品,，測(cè)試方法有哪些區(qū)別？

儀器測(cè)試結(jié)果如何分析解讀

11月13日,，HORIBA的資深工程師們,，就拉曼、熒光,、橢圓偏正光譜儀器日常使用技巧,，為大家分享了自己多年的寶貴（xue）經(jīng)（lei）驗(yàn)（shi）。分享過(guò)程中,，同學(xué)們也紛紛提出自己的問(wèn)題,，不知道是否也有你的困惑，我們一起看看吧：

熒光光譜

1.為什么樣品信號(hào)之前的背景光平臺(tái)不是平的,？

在進(jìn)行磷光壽命測(cè)試時(shí),，前端的小段曲線是由光源產(chǎn)生的，即激發(fā)光還沒(méi)有*消失,，就開(kāi)始了樣品信號(hào)采集,，后邊部分屬于光源消失后磷光衰減的信號(hào)，進(jìn)行壽命擬合的時(shí)候只要選擇后邊尾部即可,。

2.問(wèn)水拉曼峰怎么測(cè)?

1）開(kāi)啟儀器,；

2）將標(biāo)準(zhǔn)盛有三重去離子水的比色皿放入樣品倉(cāng)；

3）打開(kāi)軟件,，選擇Spectra——>emmission功能,；

4）點(diǎn)擊Run進(jìn)行信號(hào)采集即可。參數(shù)詳見(jiàn)如下：

激發(fā)波長(zhǎng)350nm,，水拉曼峰值,，峰值波長(zhǎng)397nm,。實(shí)驗(yàn)條件：激發(fā)波長(zhǎng)350nm，帶寬5nm,，0.5nm步進(jìn),，發(fā)射波長(zhǎng)掃描范圍365~450nm，帶寬5nm,，積分時(shí)間1s,；樣品要求：必須是超純水，三重蒸餾水或去離子水,，HPLC級(jí)（>18.2 MΩ,<10ppb 溶解有機(jī)碳）或相同水質(zhì)的水樣,。用4mL石英熒光比色皿

3.ms量級(jí)熒光壽命如何測(cè)量？

配置SpectrLED,、Delta-HUB和相應(yīng)的探測(cè)器,，使用磷光壽命測(cè)試功能即可進(jìn)行ms級(jí)的磷光壽命測(cè)量。具體測(cè)量及擬合方法可以應(yīng)用工程師,。

4.薄膜樣品怎么測(cè)量,？

將薄膜及其載玻片固定在固體樣品支架上，即可進(jìn)行穩(wěn)瞬態(tài)熒光測(cè)試,，但是有的薄膜樣品散射較強(qiáng),，為了避免雜散光的干擾，一般需要使用相應(yīng)的濾光片,，另外Horiba提供前置測(cè)量附件,，可以有效避免雜散光的干擾。

5.用HORIBA的熒光光譜儀測(cè)熒光壽命,，是用上升沿還是下降沿?cái)M合壽命的?

對(duì)于熒光壽命,，擬合時(shí)上升下降沿的信號(hào)都要用到，對(duì)于磷光壽命,，僅用下降沿部分?jǐn)M合即可,。具體擬合步驟及要點(diǎn)可與工程師。

橢圓偏振

1.請(qǐng)問(wèn)老師,，這個(gè)可以測(cè)量顆粒物表層吸附物質(zhì)的厚度嗎,？納米級(jí)別，煙塵顆粒

由于橢偏光斑在微米至毫米尺度,，無(wú)法分析離散態(tài)的納米級(jí)別顆粒表層

2.老師您好,，請(qǐng)問(wèn)襯底是石英片，可以測(cè)膜的厚度嗎,？

可以,，只要薄膜光學(xué)透明即可使用橢偏測(cè)試

拉曼光譜

1.CLS那個(gè)沒(méi)看懂？

簡(jiǎn)單的來(lái)說(shuō),，CLS是數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)的分析方法,。夾峰法是以單個(gè)譜峰的峰強(qiáng),、峰面積、峰位的特性為拉曼成像依據(jù),。而CLS是以整張光譜或者某段光譜為依據(jù),，賦予不同的顏色。適用于已知混合物的拉曼成像,。

2.細(xì)胞的那個(gè)是這么做的呀？

詳細(xì)請(qǐng)見(jiàn)文章ACS Appl. Mater. Interfaces, 2017, 9 (7), pp 5828–5837,，文章的拉曼部分在北京DEMO實(shí)驗(yàn)中心完成的,，歡迎討論。

3.用JobinYvonLabRam HR800儀器,，325 nm 的激光測(cè)薄膜光致發(fā)光,，有時(shí)PL譜的曲線有波動(dòng)，就是線一抖一抖的,，請(qǐng)問(wèn)能怎么改善呢,？能測(cè)到發(fā)光峰，但是曲線上有很多小的正弦波,。

兩個(gè)方面：一個(gè)需要標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)試,，檢驗(yàn)儀器本身是否有問(wèn)題。另一個(gè)方面,，考慮薄膜的厚度問(wèn)題,，是否剛好發(fā)生多次反射。之前有經(jīng)歷,，特定的玻璃片上測(cè)樣品,，也有小正弦波，更換玻璃片之后就沒(méi)有了,。

4.那請(qǐng)問(wèn)如果是貼壁細(xì)胞呢 直接光斑掃描,？

貼壁細(xì)胞，做完封片,，可以直接通過(guò)平臺(tái)移動(dòng)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞成像,。

5.指甲油有要求嗎？指甲油不要涂到樣品上,？

指甲油本身有很好的拉曼信號(hào),，不能直接涂到樣品上，建議選擇亮色,，這樣能夠看清楚指甲油的本身分布,。若樣品量比較大，建議選擇大號(hào)的蓋玻片,，操作相對(duì)簡(jiǎn)單,。

6.請(qǐng)問(wèn)G/D的物理意義

G峰為石墨烯的特征峰,，歸屬于sp2碳原子的面內(nèi)振動(dòng)，出現(xiàn)在1580 cm-1附近,，該峰能夠表征石墨烯的層數(shù),。D峰為石墨烯的無(wú)序振動(dòng)峰，出現(xiàn)在1350 cm-1附近處,，表征石墨烯中的結(jié)構(gòu)缺陷或邊緣,。所以G/D峰，可以反映石墨烯的層數(shù)和缺陷分布,。

7.測(cè)細(xì)胞必須要涂指甲油嗎,？

不是必須，封片的好處是減緩水份蒸發(fā),。

8.老師,，做礦物的話激光波長(zhǎng)用多少合適

大多數(shù)礦物532 nm激光比較合適，對(duì)于有熒光背景的,，考慮紅光激發(fā),。

9.半導(dǎo)體異物量測(cè)方式?測(cè)試過(guò)532,633,785 laser量測(cè)都只有螢光訊號(hào),異物大小約1~3um

若異物在表層，可以考慮325 nm嘗試下,。若還是不行是否可以考慮用PL成像來(lái)區(qū)別異物,。

10.如何衡量石墨烯條帶的邊緣質(zhì)量？

見(jiàn)問(wèn)題6,，G/D比值成像及D峰成像都是不錯(cuò)的選擇,。

11.魯老師，請(qǐng)問(wèn)羅丹明溶液633直接測(cè)拉曼,，如何計(jì)算光斑內(nèi)有效分子數(shù),？

影響影子的計(jì)算方法我們?cè)谏弦淮蔚膱?bào)告中有提到。詳細(xì)可參見(jiàn)Phys. Chem. Chem. Phys., 2015,17, 21149-21157,。文章是用XploRA儀器實(shí)現(xiàn)的,，歡迎討論。

12.樣品中有水,，可以用3D得到水分布嗎

樣品若是半透明的,，可以實(shí)現(xiàn)水的分布的3D. 常見(jiàn)的地質(zhì)樣品，包裹體中的水分可以用3D表征,。這是一篇文章,，里面用拉曼證明了油水凝膠中的水分分布，你可以參考下,。Nature Communications 8, Article number: 15911 (2017) doi:10.1038/ncomms15911,。文章的拉曼部分在北京DEMO實(shí)驗(yàn)室完成的，歡迎討論,。

13.請(qǐng)問(wèn)測(cè)拉曼時(shí)熒光效應(yīng)太強(qiáng),，背底太高可以怎么改善,？一般是某些樣品會(huì)出現(xiàn)，跟樣品有關(guān)系,，可是又需要樣品的拉曼數(shù)據(jù)

抑制熒光背景的方法：更換不同的激發(fā)波長(zhǎng),；長(zhǎng)時(shí)間激光照射光漂白；數(shù)值處理等,。目前zui有效的是更換不同的激發(fā)波長(zhǎng)測(cè)試,。

14.請(qǐng)介紹一下實(shí)時(shí)在線原位拉曼技術(shù)？

在線原位技術(shù)是一個(gè)比較寬泛的命題,，常見(jiàn)的有有機(jī)化學(xué)合成在線檢測(cè),，高溫高壓在線檢測(cè)，鋰電池在線檢測(cè),，電化學(xué)在線檢測(cè)。若大家都有興趣,，我們可以專門(mén)利用一次講座交流,。

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結(jié)合旗下具有近 200 多年發(fā)展歷史的 Jobin Yvon 光學(xué)光譜技術(shù)，HORIBA Scientific 致力于為科研及工業(yè)用戶提供先進(jìn)的檢測(cè)和分析工具及解決方案,。如：光學(xué)光譜,、分子光譜、元素分析,、材料表征及表面分析等先進(jìn)檢測(cè)技術(shù),。今天HORIBA 的高品質(zhì)科學(xué)儀器已經(jīng)成為科研、各行業(yè)研發(fā)及質(zhì)量控制的,。