使用光譜儀器時，如何巧妙制樣,？

針對不同的樣品,，測試方法有哪些區(qū)別？

儀器測試結果如何分析解讀

11月13日,，HORIBA的資深工程師們,，就拉曼,、熒光、橢圓偏正光譜儀器日常使用技巧,，為大家分享了自己多年的寶貴（xue）經(jīng)（lei）驗（shi）。分享過程中,，同學們也紛紛提出自己的問題,，不知道是否也有你的困惑,，我們一起看看吧：

熒光光譜

1.為什么樣品信號之前的背景光平臺不是平的？

在進行磷光壽命測試時,，前端的小段曲線是由光源產(chǎn)生的,，即激發(fā)光還沒有*消失，就開始了樣品信號采集,，后邊部分屬于光源消失后磷光衰減的信號，進行壽命擬合的時候只要選擇后邊尾部即可,。

2.問水拉曼峰怎么測?

1）開啟儀器,；

2）將標準盛有三重去離子水的比色皿放入樣品倉；

3）打開軟件,，選擇Spectra——>emmission功能,；

4）點擊Run進行信號采集即可。參數(shù)詳見如下：

激發(fā)波長350nm,，水拉曼峰值,，峰值波長397nm,。實驗條件：激發(fā)波長350nm，帶寬5nm,，0.5nm步進,，發(fā)射波長掃描范圍365~450nm，帶寬5nm,，積分時間1s,；樣品要求：必須是超純水，三重蒸餾水或去離子水,，HPLC級（>18.2 MΩ,<10ppb 溶解有機碳）或相同水質的水樣,。用4mL石英熒光比色皿

3.ms量級熒光壽命如何測量？

配置SpectrLED,、Delta-HUB和相應的探測器，使用磷光壽命測試功能即可進行ms級的磷光壽命測量,。具體測量及擬合方法可以應用工程師。

4.薄膜樣品怎么測量,？

將薄膜及其載玻片固定在固體樣品支架上，即可進行穩(wěn)瞬態(tài)熒光測試,，但是有的薄膜樣品散射較強，為了避免雜散光的干擾,，一般需要使用相應的濾光片，另外Horiba提供前置測量附件,，可以有效避免雜散光的干擾,。

5.用HORIBA的熒光光譜儀測熒光壽命，是用上升沿還是下降沿擬合壽命的?

對于熒光壽命,，擬合時上升下降沿的信號都要用到，對于磷光壽命,，僅用下降沿部分擬合即可。具體擬合步驟及要點可與工程師,。

橢圓偏振

1.請問老師，這個可以測量顆粒物表層吸附物質的厚度嗎,？納米級別,，煙塵顆粒

由于橢偏光斑在微米至毫米尺度,，無法分析離散態(tài)的納米級別顆粒表層

2.老師您好,，請問襯底是石英片,，可以測膜的厚度嗎,？

可以，只要薄膜光學透明即可使用橢偏測試

拉曼光譜

1.CLS那個沒看懂,？

簡單的來說，CLS是數(shù)據(jù)統(tǒng)計的分析方法,。夾峰法是以單個譜峰的峰強,、峰面積、峰位的特性為拉曼成像依據(jù),。而CLS是以整張光譜或者某段光譜為依據(jù),，賦予不同的顏色。適用于已知混合物的拉曼成像,。

2.細胞的那個是這么做的呀？

詳細請見文章ACS Appl. Mater. Interfaces, 2017, 9 (7), pp 5828–5837,，文章的拉曼部分在北京DEMO實驗中心完成的，歡迎討論,。

3.用JobinYvonLabRam HR800儀器，325 nm 的激光測薄膜光致發(fā)光,，有時PL譜的曲線有波動，就是線一抖一抖的,，請問能怎么改善呢？能測到發(fā)光峰,，但是曲線上有很多小的正弦波,。

兩個方面：一個需要標準樣品測試，檢驗儀器本身是否有問題,。另一個方面,，考慮薄膜的厚度問題,，是否剛好發(fā)生多次反射。之前有經(jīng)歷,，特定的玻璃片上測樣品，也有小正弦波,，更換玻璃片之后就沒有了。

4.那請問如果是貼壁細胞呢 直接光斑掃描,？

貼壁細胞,，做完封片，可以直接通過平臺移動實現(xiàn)細胞成像,。

5.指甲油有要求嗎,？指甲油不要涂到樣品上？

指甲油本身有很好的拉曼信號,，不能直接涂到樣品上,，建議選擇亮色，這樣能夠看清楚指甲油的本身分布,。若樣品量比較大,，建議選擇大號的蓋玻片，操作相對簡單,。

6.請問G/D的物理意義

G峰為石墨烯的特征峰,，歸屬于sp2碳原子的面內(nèi)振動，出現(xiàn)在1580 cm-1附近,，該峰能夠表征石墨烯的層數(shù),。D峰為石墨烯的無序振動峰，出現(xiàn)在1350 cm-1附近處,，表征石墨烯中的結構缺陷或邊緣,。所以G/D峰，可以反映石墨烯的層數(shù)和缺陷分布,。

7.測細胞必須要涂指甲油嗎,？

不是必須，封片的好處是減緩水份蒸發(fā),。

8.老師,，做礦物的話激光波長用多少合適

大多數(shù)礦物532 nm激光比較合適，對于有熒光背景的,，考慮紅光激發(fā),。

9.半導體異物量測方式?測試過532,633,785 laser量測都只有螢光訊號,異物大小約1~3um

若異物在表層,，可以考慮325 nm嘗試下。若還是不行是否可以考慮用PL成像來區(qū)別異物,。

10.如何衡量石墨烯條帶的邊緣質量,？

見問題6，G/D比值成像及D峰成像都是不錯的選擇,。

11.魯老師,，請問羅丹明溶液633直接測拉曼，如何計算光斑內(nèi)有效分子數(shù),？

影響影子的計算方法我們在上一次的報告中有提到,。詳細可參見Phys. Chem. Chem. Phys., 2015,17, 21149-21157。文章是用XploRA儀器實現(xiàn)的,，歡迎討論,。

12.樣品中有水，可以用3D得到水分布嗎

樣品若是半透明的,，可以實現(xiàn)水的分布的3D. 常見的地質樣品,，包裹體中的水分可以用3D表征。這是一篇文章,，里面用拉曼證明了油水凝膠中的水分分布，你可以參考下,。Nature Communications 8, Article number: 15911 (2017) doi:10.1038/ncomms15911,。文章的拉曼部分在北京DEMO實驗室完成的，歡迎討論,。

13.請問測拉曼時熒光效應太強,，背底太高可以怎么改善？一般是某些樣品會出現(xiàn),，跟樣品有關系,，可是又需要樣品的拉曼數(shù)據(jù)

抑制熒光背景的方法：更換不同的激發(fā)波長；長時間激光照射光漂白,；數(shù)值處理等,。目前zui有效的是更換不同的激發(fā)波長測試。

14.請介紹一下實時在線原位拉曼技術,？

在線原位技術是一個比較寬泛的命題,，常見的有有機化學合成在線檢測，高溫高壓在線檢測,，鋰電池在線檢測,，電化學在線檢測。若大家都有興趣,，我們可以專門利用一次講座交流,。

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