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MDA-MB-231-luc人乳腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記
二、細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運輸?shù)暮棉k法,。收到細(xì)胞回到自己的實驗室后,，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作,，培養(yǎng)箱靜置2-4小時,。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中,，加入6ml*培養(yǎng)基,，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng),；超過80%匯合度時,，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的*培養(yǎng)基）
三,、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
1,、對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,，*脫落后吸出,，在1000RP不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液（0.M條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
