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陽離子交換柱的使用方法簡介
閱讀：9553 發(fā)布時間：2012-6-2
陽離子交換柱的使用方法
注意
Chrompack IonoSpher C 色譜柱填充的是改性硅膠材料,。向柱內(nèi)導(dǎo)入堿性溶劑（pH>6.5）或酸性溶劑（pH<2.5）會溶解硅膠材料導(dǎo)致柱子損壞。
1. 簡介
Chrompack IonoSpher C 柱填充硅膠基質(zhì)的強(qiáng)陽離子交換材料,，含有磺酸鹽功能團(tuán),。特別設(shè)計用于使用常規(guī)HPLC分析有機(jī)和無機(jī)陽離子。
2. 色譜柱老化
在開始分析工作以前,，柱子必須經(jīng)過正確的老化,。一個沒有正確老化的柱子可能會帶來問題，諸如很差的柱效或者分離情況發(fā)生變化等等,。
要老化這類柱子,，首先要使用甲醇淋洗，然后使用去離子水,。再用你選用的洗脫液進(jìn)行平衡,。
在發(fā)貨以前，每根柱子都已經(jīng)測試過并進(jìn)行了老化,。因此沒有必要在*次使用時用水沖洗）,。
3. 洗脫液
推薦在這類柱上使用的洗脫液是要求低電導(dǎo)的緩沖液，例如檸檬酸或酒石酸緩沖液（或其混合溶液）,，pH范圍從2.5到6.5,，其中有乙二胺作為洗脫陽離子,。
不能使用水楊酸緩沖液，因為水楊酸分解產(chǎn)物會改變固定相的性質(zhì),。
洗脫液在使用以前要脫氣,，并用0.5微米濾膜過濾，防止發(fā)生檢測和泵送問題,。
一定要在開始使用系統(tǒng)以前檢查有否微生物生長,，否則你的柱子會堵塞，柱壓會升高到無法接受的水平,。
Chrompack IonoSpher C 色譜柱填充的是改性硅膠材料,。向柱內(nèi)導(dǎo)入堿性溶劑（pH>6.5）或酸性溶劑（pH<2.5）會溶解硅膠材料導(dǎo)致柱子損壞。
1. 簡介
Chrompack IonoSpher C 柱填充硅膠基質(zhì)的強(qiáng)陽離子交換材料,，含有磺酸鹽功能團(tuán),。特別設(shè)計用于使用常規(guī)HPLC分析有機(jī)和無機(jī)陽離子。
2. 色譜柱老化
在開始分析工作以前,，柱子必須經(jīng)過正確的老化,。一個沒有正確老化的柱子可能會帶來問題，諸如很差的柱效或者分離情況發(fā)生變化等等,。
要老化這類柱子,，首先要使用甲醇淋洗，然后使用去離子水,。再用你選用的洗脫液進(jìn)行平衡,。
在發(fā)貨以前，每根柱子都已經(jīng)測試過并進(jìn)行了老化,。因此沒有必要在*次使用時用水沖洗）,。
3. 洗脫液
推薦在這類柱上使用的洗脫液是要求低電導(dǎo)的緩沖液，例如檸檬酸或酒石酸緩沖液（或其混合溶液）,，pH范圍從2.5到6.5,，其中有乙二胺作為洗脫陽離子,。
不能使用水楊酸緩沖液，因為水楊酸分解產(chǎn)物會改變固定相的性質(zhì),。
洗脫液在使用以前要脫氣,，并用0.5微米濾膜過濾，防止發(fā)生檢測和泵送問題,。
一定要在開始使用系統(tǒng)以前檢查有否微生物生長,，否則你的柱子會堵塞，柱壓會升高到無法接受的水平,。
4. 流量和壓力
| 柱內(nèi)徑（毫米） | 流速（ml/min）* | 流速（ml/min）zui高 |
| 2.0 | 0.2 | 1.0 |
| 3.0 | 0.4 | 2.0 |
| 4.6 | 1.0 | 4.0 |
| 10.0 | 4.7 | 18.0 |
注意：zui高壓力：不銹鋼柱：4500psi;玻璃柱：3000psi
增加流速或者降低流速要采取小的間隔變化以防止填充床的擾動,。
如果你想更換柱子，要降低流量至0,，等待洗脫液*流出柱子為止（2分鐘）,。
拆除柱子而沒有等待壓力的降低會損壞柱子。
高柱壓的產(chǎn)生一般是由于不正確地使用柱子的結(jié)果,。
使用保護(hù)柱（見第6節(jié)）會防止污染物沉積在分析柱上,。
5. 樣品處理
保持柱子長壽的關(guān)鍵是進(jìn)樣前適當(dāng)?shù)牡臉悠诽幚怼Ｄ惚仨毞乐箤⑹杷?/span>/與流動相極性差別很大的化合物泵入色譜柱,，不管是來自流動相還是樣品。特別地,，要禁止導(dǎo)入顆粒雜質(zhì),。這些zui終都會造成操作壓力的增高而且非常困難或者不可能去除。
6. 保護(hù)柱
一定要使用保護(hù)柱,，因為樣品和洗脫液污染可能會造成柱壓力的增高而且影響選擇性,。對于ChromSep 柱我們建議使用ChromSep Cation 交換保護(hù)柱。當(dāng)柱壓增高的或者觀察到柱效降低的時候就需要更換保護(hù)柱了,。對于常用不銹鋼柱,，我們建議使用Chromguard Cation exchange High Efficiency（）柱（10X3.0mm）或High Capacity（高容量）柱（50X3.0mm）。
7. 進(jìn)樣量和濃度
| 柱尺寸（長度*內(nèi)徑） | zui大樣品體積 |
| 250×2.0mm | ±10μl |
| 200×3.0mm | ±15μl |
| 250×4.6mm | ±50μl |
| 250×10.0mm | ±250μl |
當(dāng)樣品的洗提強(qiáng)度比洗脫液低（在柱樣品預(yù)濃縮）的時候,，更高的樣品量也可以注射,。
8. 溫度
Chrompack IonoSpher C 柱可以在室溫環(huán)境使用。為了提高柱子的穩(wěn)定性,，建議不要在40°C以上使用,。
Chrompack IonoSpher C 柱可以在室溫環(huán)境使用。為了提高柱子的穩(wěn)定性,，建議不要在40°C以上使用,。
9. 貯存
在貯存柱子以前，建議先用去離子水,，然后用甲醇沖洗,。一定不要在柱子內(nèi)充滿緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下貯存色譜柱。
在貯存柱子以前，建議先用去離子水,，然后用甲醇沖洗,。一定不要在柱子內(nèi)充滿緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下貯存色譜柱。
10. 檢測靈敏度
對于陽離子的檢測,，建議進(jìn)行電導(dǎo)率的測定,使用前面提到的低電導(dǎo)洗脫液,。
對于陽離子的檢測,，建議進(jìn)行電導(dǎo)率的測定,使用前面提到的低電導(dǎo)洗脫液,。
11.柱效損失的可能原因
1）額外的峰展寬,。要保證管路的長度和內(nèi)徑都保持zui小。
2）洗脫的平衡時間不夠,。
3）不正確的洗脫液pH或洗脫液的離子強(qiáng)度,。
4）洗脫液中存在不正確的陰離子。制備新鮮的洗脫液,。
5）固定相污染,。
a.高柱壓伴隨分辨率降低。
1] 顆粒物積聚在燒結(jié)物或者填充物床上,。
（a）樣品來源---過濾或離心
（b）洗脫液來源---過濾洗脫液,，封閉洗脫液容器。
（c）系統(tǒng)來源---沖洗整個系統(tǒng)管路和泵;安裝在線系統(tǒng)過濾器,。
2] 蛋白質(zhì)類物質(zhì)的積聚
（a）微生物在樣品中生長,。
（b）微生物在洗脫液中生長。
b. 正常柱壓伴隨柱效降低
1] 有機(jī)污染
（a）樣品中有脂肪,，油脂,，脂質(zhì),。固定相的表面被覆蓋,。
（b）從樣品中帶來的不確切的有機(jī)物或未正確制備的洗脫液。
（c）在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機(jī)物,，例如在運(yùn)輸時從大氣中帶來,。
1）額外的峰展寬,。要保證管路的長度和內(nèi)徑都保持zui小。
2）洗脫的平衡時間不夠,。
3）不正確的洗脫液pH或洗脫液的離子強(qiáng)度,。
4）洗脫液中存在不正確的陰離子。制備新鮮的洗脫液,。
5）固定相污染,。
a.高柱壓伴隨分辨率降低。
1] 顆粒物積聚在燒結(jié)物或者填充物床上,。
（a）樣品來源---過濾或離心
（b）洗脫液來源---過濾洗脫液,，封閉洗脫液容器。
（c）系統(tǒng)來源---沖洗整個系統(tǒng)管路和泵;安裝在線系統(tǒng)過濾器,。
2] 蛋白質(zhì)類物質(zhì)的積聚
（a）微生物在樣品中生長,。
（b）微生物在洗脫液中生長。
b. 正常柱壓伴隨柱效降低
1] 有機(jī)污染
（a）樣品中有脂肪,，油脂,，脂質(zhì),。固定相的表面被覆蓋,。
（b）從樣品中帶來的不確切的有機(jī)物或未正確制備的洗脫液。
（c）在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機(jī)物,，例如在運(yùn)輸時從大氣中帶來,。
12. 對于糾正污染問題的可能有效的操作
1）準(zhǔn)備新鮮的洗脫液
在很多情況下,，柱效的喪失可以歸結(jié)為洗脫液的污染,。所以,，要在使用柱子以前準(zhǔn)備新鮮的洗脫液，沖洗所有液體管路,。洗脫液應(yīng)當(dāng)用0.2到0.4微米的濾膜過濾,，在使用以前要脫氣,。
2）色譜柱再生
要進(jìn)行色譜柱的再生工作
a. 首先倒轉(zhuǎn)色譜柱
b. 以0.4ml/min的流速用1M NH4NO3洗脫30ml。
c. 以0.4ml/min的流速用40：60 （v：v）的甲醇/水洗脫30ml。
d. 以0.4ml/min的流速用異丙醇洗脫30ml,。
e. 以0.4ml/min的流速用水洗脫30ml,。
f. 以0.4ml/min的流速用洗脫液洗脫30ml。
g. 將柱子轉(zhuǎn)回正常方向,。
用洗脫液平衡,。
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