利用分析樣品和填料中導(dǎo)入的離子交換基團(tuán)之間的靜電相互作用的差異的分離模式,。根據(jù)離子交換官能團(tuán)的電荷不同,,可分為陰離子交換色譜和陽離子交換色譜,。陰離子交換色譜用填料中,,導(dǎo)入了陽離子性的叔氨基或季銨基等,;陽離子交換色譜用填料中,,導(dǎo)入了陰離子性的磺酸基或羧基等,。蛋白的靜電性質(zhì)隨pH值的變化而發(fā)生變化。正負(fù)電荷正好平衡時,,整體不帶電荷的固有pH值稱為等電點(diǎn)(表示為PI),。在更低pH值時,整體帶正電荷,;更高pH值時,,整體帶負(fù)電荷。
因此在陰離子交換色譜中,,用pH值略高于(+0.5至+1.0)等電點(diǎn)的流動相,;在陽離子交換色譜中,用pH值略低于(-0.5至-1.0)等電點(diǎn)的流動相作為分離條件優(yōu)化的初始起點(diǎn),。
與填料靜電結(jié)合的分析樣品一般使用鹽濃度梯度洗脫法進(jìn)行洗脫,。增加流動相的離子強(qiáng)度(鹽濃度)時,靜電相互作用會逐漸減弱,。當(dāng)與離子交換基的靜電結(jié)合斷開時,,分析樣品會在色譜柱內(nèi)移動,如下圖,。由于分析樣品不同,,脫離填料時的鹽濃度也就不同。因此,,樣品中等電點(diǎn)不同的組分就在不同時間被洗脫而分離開,。由于蛋白的靜電性質(zhì)隨pH值的變化而變化,因此,,也可以通過改變pH值進(jìn)行分離(稱為pH梯度洗脫法),。
離子交換色譜具有分辨率高,、吸附量大(載量高)等特點(diǎn)。并且,,通過調(diào)整梯度洗脫的梯度,,可以輕松調(diào)控或優(yōu)化分離。