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上海源葉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： S30260異硫氰酸胍,30259鹽酸胍,嗜熱菌蛋白酶 |
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更新時間：2024-07-03 07:44:46瀏覽次數(shù)：308
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英文名：Streptavidin
別名：鏈酶親和素,；鏈霉親和素
CAS號：9013-20-1
MDL：MFCD00082035
介紹：鏈親和素（SA）是阿維丁鏈霉菌（Streptomyces avidinii）表達的一種小分子蛋白。本制品為127AA核心結(jié)構(gòu),，每分子SA結(jié)合4個生素分子,，國際比活性12~15U/mg。SA與禽類親和素（Avidin,，AV）相比特異性更強,，與生素結(jié)合后半衰期長達6h，而AV半衰期僅為1h,。由于SA不含糖基且等電點接近中性,，因此SA在檢測應用中具有比AV更低的非特異性背景。
用途：本制品已廣泛應用于制備SA-偶聯(lián)酶制劑（如SA-HRP,，SA-AP等）,，SA-偶聯(lián)熒光素（即熒光染料,，如SA-FITC,，SA-Cy2，SA-Cy3等）,、SA-偶聯(lián)磁珠等,，進而參與酶聯(lián)免疫吸附檢測（ELISA）、免疫組化,、親和色譜填料,、含StrepTagII標簽（8-AA寡肽）的蛋白純化、生物傳感器,、生物納米微球,、預靶向制藥研究、生物芯片被料等生物技術領域,。
優(yōu)點：高親和力,，高偶聯(lián)效率。
S12020鏈親和素注意事項：
1.凍干粉溶解后應避免反復凍融,，建議分裝成小包裝后分別凍存,。
2.凍干粉中含20mMNa2CO3 pH9.5的緩沖體系，若用于包被,，酶標可以直接使用,。若用于膠體金,，調(diào)節(jié)pH或透析后使用。溶解后立即使用效果好,，不能4℃長期存放,。
3.若用于ELISA包板，膠體金烘金,，硝酸纖維素膜上用SA劃線后需要烘干保存,，包被液或緩沖液中需加入20%蔗糖作為活性保護劑。
【操作步驟簡述】
一,、微孔板包被
1,、用碳酸鈉緩沖溶液（pH 9.6）溶解凍干粉，將濃度稀釋成3-10ug/ml（客戶可設定梯度進行實驗）
注意：由于SA等電點是7.4,，包被不建議使用中性緩沖液
2,、用移液器吸取100ul/孔，4℃過夜包被或者37℃包被2h
3,、洗滌：倒盡板孔中液體,，加200ul洗滌液，靜放三分鐘,，反復三次,，最后將反應板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡,，扣干
4,、后續(xù)進入封閉、洗滌,、抗原抗體結(jié)合流程
若不立即進入下游實驗,，包被板需要進行烘干保存時。包被前,，將包被液中加入20%蔗糖作為活性保護劑,。
二、SA偶聯(lián)磁珠
2.1,、NHS 活化
1,、充分混勻磁珠后，取100μl PangoBeads COOH磁珠到1.5 ml離心管中,，置于磁性分離上,，待固液分離后去除上清液；
2,、取200μl MES溶液（25mM,，pH 5.0）加入到離心管中，置于磁性分離上,，待固液分離后去除上清液,。重復該步驟1 次,；
3、迅速加入新配制的50μl EDC溶液和50μl NHS溶液 （均為50mg/ml,， 以上述MES 配制）到裝有磁珠的離心管中,，漩渦混勻使磁珠充分懸浮，室溫下垂直混合30min,；
4,、反應結(jié)束后，加入100μl上述 MES溶液洗滌2次,；（活化狀態(tài)不宜長時間保存,， 建議立即進行偶聯(lián)）。
2.2,、蛋白偶聯(lián)
1,、將離心管置于磁性上，分離去除上清液,，加入100μl蛋白溶液（25mM MES,，pH5.0） 輕柔地混勻；（蛋白濃度在0.1-2.0mg/ml）
2,、在室溫下垂直混合反應2h,，或在4℃條件下垂直混合過夜；
3,、反應結(jié)束后將離心管置于磁分離架上,，磁性分離去除上清液，加入1ml乙醇胺溶液 （3M,，pH9.0）洗滌磁珠2次,；
4,、加1ml乙醇胺溶液（3M, pH9.0）于離心管中,，渦旋30s，將離心管置于垂直混合 儀中室溫反應1-2h,；
5,、反應結(jié)束后，將離心管置于磁力架上,，待固液分離后移除上清液,，然后加入100μl純化水輕柔渦旋30s，磁吸分離,，重復該步驟1次,；
6、加入適量的保存液（可根據(jù)需要來確定保存溶液的加入量,，以調(diào)整偶聯(lián)配體磁珠的加入適量的保存液（可根據(jù)需要來確定保存溶液的加入量,，以調(diào)整偶聯(lián)配體磁珠的濃度）保存于4°,，如果固定的生物配體穩(wěn)定，可以在保存溶液中加入0.02%（W/V）作為抑菌劑,。
外觀： 凍干粉
敏感性： 對熱敏感,易吸潮
儲存條件： -20℃
S12020鏈親和素用途： Applications for enzyme-labeled (HRP, AP) streptavidin: Enzyme immunoassays (EIA), including enzyme-linked immunsorbent assays (ELISA) with biotinylated antibodies Cell and tissue staining (for light microscopy) Western blotting (WB) and other membra
注意：部分產(chǎn)品我司僅能提供部分信息,，僅供客戶參考交流研究之用。
