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上海源葉生物科技有限公司
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瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)診斷馬傳染性貧血病
2012-8-4 閱讀(970)
（一）材料與試劑
1．精制瓊脂粉
2．打孔器,、加樣器,、平皿
3．標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和標(biāo)準(zhǔn)陰性血清，由的生物制品廠購買,。
4．馬傳染性貧血病瓊脂擴(kuò)散用抗原,，由的生物制品廠購買。
5．pH7.4PBS液
（二）操作方法
1．取瓊脂粉1g,，加含有1/萬硫柳汞的PBS液100ml,，水浴加熱使之*融化,。
2．取平皿（直徑9cm），將融化的瓊脂倒入,，每個平皿倒入15ml～18ml,，使其厚度約為2.5mm，冷卻后加蓋,，放入4℃～8℃冰箱內(nèi),，至少4h。
3．按7孔梅花圖案打孔,，中央孔一個,，孔徑4mm，外周孔6個,，直徑6mm,，孔距8mm（中間孔至外周孔的中心距離），封底,。
4．中央孔加抗原,，2、5號孔加標(biāo)準(zhǔn)陽性血清,，其余1,、3、4,、6孔分別加被檢血清,，加滿為止。加畢后,，平皿加蓋,，平放入鋪有數(shù)層濕紗布的帶蓋搪瓷盤內(nèi)，置15℃～30℃條件下孵育,。每日觀察一次,，連續(xù)3天。
（三）結(jié)果判定
當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)陽性血清孔與抗原之間出現(xiàn)一條明顯致密的沉淀線時,，再進(jìn)行被檢血清孔的判定。
陽性：被檢血清孔與抗原孔之間形成一條沉淀線,，或者標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的沉淀線末端向內(nèi)彎向毗鄰的被檢血清孔,。
陰性：被檢血清孔與抗原孔之間無沉淀線，且標(biāo)準(zhǔn)血清陽性孔與抗原孔之間的沉淀線直向毗鄰的被檢血清孔,。
可疑：標(biāo)準(zhǔn)陽性血清孔與抗原孔之間的沉淀線末端似乎彎向毗鄰被檢血清孔,，但不易判斷。此種結(jié)果判為可疑,?？梢山Y(jié)果必須進(jìn)行復(fù)試,，將抗原做2×，4×,，6×,，8×等倍數(shù)稀釋，進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散,，觀察時間可延長至5d,，zui后判定結(jié)果。
