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環(huán)狀沉淀反應(yīng)

2012-8-4  閱讀(1352)

以炭疽環(huán)狀沉淀反應(yīng)為例,,此反應(yīng)又稱Ascoli氏反應(yīng)。
(一)材料與試劑
1.已知炭疽沉淀血清,,購(gòu)買自生物制品所,。
2.待測(cè)炭疽沉淀抗原
3.試管5mm×50mm、滴管
4.0.3%石炭酸生理鹽水
(二)操作方法
1.待測(cè)抗原的提取
(1)取可疑為炭疽而死的病畜的實(shí)質(zhì)臟器1g,,放入試管或小三角燒瓶中,,加生理鹽水5ml~10ml,煮沸30min~40min,,冷卻后用濾紙過(guò)濾得清澈的液體,,即為待測(cè)抗原。
(2)如病料是皮張,,可采用冷浸法,。將樣品高壓滅活后,剪成小塊并稱重,,加約5倍的0.5%生理鹽水,,室溫浸泡18h~24小時(shí),,濾紙過(guò)濾,,即為待檢抗原。
2.取試管5支(5mm×50mm)置于試管架上,編號(hào),。第1,、2試管內(nèi)加炭疽沉淀血清,第3,、4試管內(nèi)加正常血清,,第5管內(nèi)加待檢抗原,分別用毛細(xì)滴管加至4mm~5mm,。
3.第1,、4、5試管輕輕疊加等量緩沖液,,第2,、3試管輕輕疊加等量待檢抗原。為防止上下兩界面破壞,,可將小試管從試管架取出,,微傾斜,沿試管壁加入緩沖液或抗原,。
4.在試管架上靜置數(shù)分鐘,,觀察結(jié)果。
(三)結(jié)果判定
第2管內(nèi)兩液界面出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀帶,,其余管無(wú)此種沉淀帶判為陽(yáng)性,。
(四)注意事項(xiàng)
1.反應(yīng)物必須清澈,如不清澈,,可離心,,取上清液或冷藏后使脂類物質(zhì)上浮,用吸管吸取底層的液體,。
2.必須進(jìn)行對(duì)照觀察,,以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。
3.采用環(huán)狀沉淀反應(yīng),,用以沉淀素效價(jià)滴定時(shí),,可將抗原做100×,1 000×,,2 000×,,4 000×,8 000×等稀釋,,分別疊加于抗血清上,,以出現(xiàn)環(huán)狀沉淀的zui大稀釋倍數(shù),即為該血清的沉淀素效價(jià),。



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