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上海源葉生物科技有限公司
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IL-17的檢測
2012-5-5 閱讀(376)
IL-17是新近被確認的一種細胞因子,，由T細胞,，主要是CD4+T細胞產(chǎn)生,，其靶細胞廣泛,。可激活轉錄因子NF-KB,，誘導纖維母細胞產(chǎn)生IL-6,、ID8、GM-CSF,、和膜性細胞間粘附分子1（1CAM-1）,，促進由亞適劑量PHA所誘導的T細胞增殖。目前編碼IL-17及其受體的基因核苷酸序列已被部分測定,。
（1）IL-17的誘導：取人PBMC或純化的CD4+T細胞,，加入誘導劑（PMA 5ng／mL+ionomycin 3ug／mL，或ConA 63ug／mL,，或抗CD28抗體+CD3抗體）,，37℃孵育48—72h。收集培養(yǎng)上清液檢測IL-17含量（ELISA法）或生物學活性,。
（2）IL-17生物學活性檢測：通過誘導類風濕性關節(jié)炎滑膜細胞或腎癌上皮細胞株（TUMT或CHA）產(chǎn)生IL-6,、IL-8或GM-CSF可以檢測IL-17的活性。
1）滑膜細胞的制備：外科切取關節(jié)滑膜,，剪碎后用4ug／mL膠原酶消化,，37~C孵育2～3h,，單個細胞懸液用培養(yǎng)液培養(yǎng)。細胞貼壁后,，洗去未粘附細胞,。待細胞生長至匯合，用胰蛋白酶消化傳代,。一般采用3—8代的滑膜成纖維樣細胞作為檢測用靶細胞,。
2）取96孔細胞培養(yǎng)板，每孔依次加人104滑膜細胞或是TUMT細胞（或CHA細胞）,，不同稀釋度的IL-17待測樣品,，總體積為200uL，置370（2 5％C02溫箱中孵育48h,，收集上清,，置-20℃保存以備檢測細胞因子活性。用ELISA法或生物學活性測定法檢測上清液中的II-6,、IL-8或GM-CSF等細胞因子的含量或活性,，以此推測IL-17的活性,。
