色譜柱度優(yōu)化功能,，或“GO”功能,，把線性梯度轉(zhuǎn)化成階梯梯度，在已確認(rèn)的洗脫峰附近,，優(yōu)化洗脫條件,。先用一個(gè)小的色譜柱純化一個(gè)小部分樣品，一旦運(yùn)行完畢,，選擇優(yōu)化按鈕。然后選擇目標(biāo)峰,，一個(gè)新的,，優(yōu)化了的，基于梯度洗脫方法就自動(dòng)產(chǎn)生了,。選擇一個(gè)新的色譜柱和收集支架,，分離方法就根據(jù)新柱子的大小自動(dòng)調(diào)整， 并準(zhǔn)備運(yùn)行,。
 

　　色譜柱污染后的清洗和再生：
 

　　當(dāng)柱子被污染,，它的色譜行為和沒(méi)被污染的柱子會(huì)有些不同。被污染的柱子能產(chǎn)生反壓?jiǎn)栴},。被污染的反相柱子必須清洗和再生才能恢復(fù)原來(lái)的操作條件,。
 

　　再生被污染HPLC柱子的關(guān)鍵是知道污染物的性質(zhì)并且能找到適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)去除。如果污染是因?yàn)橹貜?fù)進(jìn)樣時(shí)強(qiáng)保留物質(zhì)的累積引起的,，利用簡(jiǎn)單的步驟來(lái)除去這些污染物往往能恢復(fù)其色譜行為,。有時(shí)候，經(jīng)過(guò)多次操作以后的色譜柱用90～100%的溶劑B(雙溶劑反相系統(tǒng)中較強(qiáng)的溶劑)沖洗20個(gè)體積可以**污染物,。例如,，柱子中殘留的脂質(zhì)就能用非水溶劑如甲醇,、乙晴、四氫呋喃,。
 

　　一般來(lái)說(shuō),，所有的清洗方法都有類似的形式。所用的溶劑都是隨溶劑強(qiáng)度增加,，經(jīng)常*后一個(gè)溶劑是非常疏水的(如醋酸乙酯甚至是烴),，可以用來(lái)溶解非極性物質(zhì)如脂質(zhì)和油類。我們必須保證一系列溶劑中每個(gè)溶劑都能與下一個(gè)溶劑互混,。清洗過(guò)程要結(jié)束時(shí),，必須借助一個(gè)中等強(qiáng)度能互混的溶劑而回到原始溶劑系統(tǒng)。例如,，異丙醇是一個(gè)非常好的作為中間步驟的溶劑,，因?yàn)樗芘c正己烷或二氯甲烷互溶又能與水相溶劑互溶。但是異丙醇粘度非常大,，必須確保較低的流速以免使泵壓過(guò)高,。沖洗色譜柱時(shí)，沖洗液由色譜柱出液端直接接入廢液瓶,，不能流經(jīng)檢測(cè)池,，以**測(cè)池被污染。
 

　　反相色譜柱沒(méi)有使用緩沖溶液,，請(qǐng)使用以下溶劑系列再生：
 

　　100%甲醇→100%乙腈→75%乙腈-25%異丙醇→100%異丙醇→100%二氯甲烷→100%正己烷→100%二氯甲烷→100%異丙醇→100%乙腈,。
 

　　反相色譜柱使用緩沖溶液，請(qǐng)使用以下溶劑系列再生：
 

　　水→乙腈→氯仿(或異丙醇)→乙腈→水,。
 

　　表　用來(lái)沖洗的溶劑體積,、時(shí)間
 

　　色譜柱尺寸  柱體積  所用溶劑的體積  沖洗時(shí)間
 

　　150-4.6   2.5ml  50ml   50min
 

　　250-4.6   4.2ml  80ml   80min
 

　　每種溶劑至少?zèng)_洗20個(gè)柱體積。如250mm×4.6mmHPLC分析柱,，可以用1ml/min的流速來(lái)沖洗,，沖洗后使用沒(méi)有緩沖的流動(dòng)相進(jìn)行平衡色譜柱。
 

　　注：如果簡(jiǎn)單的有機(jī)溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì),，說(shuō)明色譜柱嚴(yán)重污染,，沖洗溶劑可以用①0.05M稀硫酸，②二甲基亞砜(DMSO),，③二甲基甲酰銨-水(50：50),，用低于0.5ml/min的流速?zèng)_洗非常有效。