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關(guān)于色譜柱的新手使用問題解答
色譜柱的新手使用問題解答：
1.對于一根常用的C18柱,，拿到一根新柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù),？為什么要這樣做,？
答：新柱活化,，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過程,，除了用流動相平衡外，有時(shí)候還必須用所測樣品對新柱進(jìn)行平衡,，特別是測定分子量比較高的多肽,，尤其重要。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子,，擴(kuò)散速度慢,，平衡所需時(shí)間也相應(yīng)較長。具體平衡方式也很簡單,，多進(jìn)幾次樣品,，直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測定,。
如果要加快平衡時(shí)間,，把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成,，連續(xù)進(jìn)樣多針,。用待測物對新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉,。
2.測定多肽,，一般采用什么柱子？流動相是乙腈和水,，還有微量的TFA,。特別是像類似三肽的短肽，應(yīng)該怎么選擇柱子,？
答：分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱能測定,，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的,。
3.氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí),，很傷柱子，如使用一段時(shí)間后,，柱效降低,，峰形改變，如何恢復(fù),？
答：氨基柱測酸性樣品,，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降,。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨)，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。
4.色譜柱的技術(shù)都有哪些,？比如封尾等，這些技術(shù)在應(yīng)用時(shí)都體現(xiàn)在哪里,？
答：色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),，填料技術(shù)自不待言，填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響,。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單,，不同固定相、不同粒徑,、不同柱管內(nèi)徑和長度,，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密,、穩(wěn)定,、均一的柱床，更多是一門藝術(shù),，需要經(jīng)驗(yàn)積累,。
國內(nèi)和國外想比，我認(rèn)為色譜柱的差距在于：國內(nèi)公司以前都不會自己開發(fā)填料,，一般買國外現(xiàn)成填料裝柱,，買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。另外因?yàn)檠b柱歷史短,，經(jīng)驗(yàn)積累少,，裝柱工藝也沒有達(dá)到較高水平。另外,，對色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料-----裸硅膠,，國產(chǎn)的還不過關(guān)，在純度,、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產(chǎn)品相比,，差距很大。
5.色譜柱技術(shù)的差距在哪里,？
答：液相色譜柱裝填實(shí)際上是有一定技巧和程序,，可能還有一些運(yùn)氣。一般使用高壓勻漿方法裝填,。也是能讓填料在溶劑內(nèi)均勻地懸浮,。然后用瞬間高壓壓實(shí)，這實(shí)際上用到了不同比例的勻漿液體,，和合適的壓力,。壓力太大，顆粒破碎,，壓力太小,，塔板數(shù)少,。同時(shí)壓力需要穩(wěn)定，不然分布不均,，拖尾嚴(yán)重,。同時(shí)還有頭上平整程度。套上套,，可以用了,。