實驗原理

花卉組織培養(yǎng)，就是分離花卉植物體的一部分,，如莖類,、莖段、葉,、花,、幼胚等，在無菌試管,，并配合一定的營養(yǎng),、激素、溫度,、光照等條件,，使其產(chǎn)生完整植株。由于其條件可以嚴格控制,，生長迅速,，1-2個月即為一個周期，因此在花卉植物的生產(chǎn)上有重要應用價值,。

快速大量繁殖方面：對一些難繁殖的名貴品種花卉及一些短期內(nèi)大量急需生產(chǎn)的花卉，應用很廣,。蘭花,、菊花、唐菖蒲等花卉利用腋芽增生,，短期得到大量植株,。非洲紫羅蘭可通過葉片，水仙可通地鱗片,，誘導產(chǎn)生不定芽,，來達到大量繁殖的目的。

花卉育種方面：百合,、鳶尾等許多花卉可以進行遠緣雜交,，由于生理代謝等方面的原因，常使雜種胚早期敗育,，因而得不到雜種植物,。而在試管中進行胚培養(yǎng)，可使其順利生長,，得到遠緣雜種,。此外還可采用愈傷組織誘變、花粉培養(yǎng)等多種方法,，來進行花卉育種,。

培育無病毒苗方面：菊花、唐菖蒲、水仙,、郁金香,、大麗花等一大批花卉靠無性繁殖法繁殖，病毒逐代傳遞積累,，危害日趨嚴重,。而分離花卉植物0.1-0.5毫米大小的生長點，培養(yǎng)得到的基本上是無病毒苗,。因此這一技術已在花卉無病毒苗的培育中廣泛應用,。

實驗設備

1. 實驗室

     1） 化學實驗室：主要承擔配制培養(yǎng)基的任務。要求具有各種化學藥品試劑,、各種玻璃器皿,、稱量天平等。

  2） 洗滌室：主要進行玻璃器皿的洗滌,，要求有自來水裝置,，同時有烘箱，以便洗后烘干,。
  3） 滅菌室：主要進行培養(yǎng)基和用具的消毒,。要有高壓滅菌鍋，具有水源和電源,。
  4） 接種室：是花卉材料分離,、消毒接種和轉移的場所。要求密閉,、清潔,、整齊、裝有紫外燈,，能隨時滅菌,。有的也可用接種箱或超凈工作臺代替。
    5） 培養(yǎng)室：是花卉材料培養(yǎng)生長的地方,。要求清潔,，保溫好，室溫均勻一致,，并有絕熱,、防火性能。
2. 設備方面
   1） 天平：供配制培養(yǎng)基時稱量藥品和激素用,。大量元素用普通天平,；微量元素和激素用分析天平。
   2） 酸度計：測定培養(yǎng)基的pH用,。
   3） 高壓滅菌鍋：是供培養(yǎng)基和器械用具滅菌用,。
   4） 烘箱：洗凈的玻璃器皿干燥滅菌用,。
   5） 蒸餾水制造裝置：得到純凈水供培養(yǎng)用。
   6） 冰箱：供貯放母液和植物材料用,。
   7） 接種箱或超凈工作臺：為植物材料接種或轉移的操作場所,。
   8） 空調(diào)機：控制室溫用。

實驗材料

培養(yǎng)基是花卉植物組織培養(yǎng)中十分重要的基質(zhì),，目前應用的有好多種,，但其主要成分大體相同，主要成分是水,，其他還有大量元素,、微量元素、維生素,、生長調(diào)節(jié)物質(zhì),、蔗糖和瓊脂等。

目前花卉組織培養(yǎng)中應用zui多的為MS培養(yǎng)基,。其組成是在配制1升（1000毫升）培養(yǎng)基時,，加硝酸an1.65克、硝酸鉀1.9克,、氯化鈣0.44克,、硫酸鎂0.37克、磷酸二氫鉀0.17克,、碘化鉀0.83毫克,、硼酸5.2毫克、硫酸鎂22.3毫克,、硫酸鋅3.6毫克、鉬酸鈉0.25毫克,、硫酸銅0.025毫克,、氯化鈷0.025毫克、硫酸鐵27.8毫克,、蔗糖30克和瓊脂7克,。其他生長調(diào)節(jié)物質(zhì)要根據(jù)花卉的種類和培養(yǎng)目的而確定。MS培養(yǎng)基中大量元素濃度過高,，為此常采用1/2,、1/4大量元素濃度作培養(yǎng)用，這樣生長效果列好,。

配制培養(yǎng)基前要準備好三角瓶,、試管、燒杯,、量筒,、吸和等玻璃器皿,，預先稱好藥品。配制時先將瓊脂溶化,，再加入在水中深解的各種營養(yǎng)元素和蔗糖,，然后用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)整培養(yǎng)基的pH，一般掌握在5.7左右,。以后可分注到養(yǎng)瓶中,，蓋好瓶蓋。培養(yǎng)基配好要經(jīng)高壓滅菌,。冷卻后放到培養(yǎng)室預培養(yǎng)3天,，如沒有雜菌污染，才可進行花卉材料的接種,。

實驗步驟

1. 從田間或溫室等地切取花卉材料,，選擇健壯無病蟲母株，取幼嫩,、分生能力強的部位,，以利生長。
2. 自來水沖洗十幾分鐘,，有泥的應刷去,。沖洗干凈后，用70%的酒精浸泡10-15秒鐘消毒,。接著用無菌水（經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水）沖洗兩次,，再用10%的漂白fen澄清液浸泡20分鐘消毒，zui后用無菌水沖洗3-4次,。帶有茸毛不易濕潤消毒的材料可加些洗衣粉,。上述操作皆應在接種箱或超凈工作臺等無菌環(huán)境條件進行。經(jīng)過表面滅菌的材料,，用無菌濾紙將水吸掉,。再用解剖刀切取所需部位，通常幾毫米大小,，培育無病毒苗則應在1毫米以下,，然后用解剖針或槍式鑷子將材料接種到培養(yǎng)瓶上培養(yǎng)。工具用完即應在95%酒精中蘸一下,，或用火焰消毒法消毒,，避免工具帶菌造成交叉污染。操作時應穿工作服,、戴工作帽,，事先洗凈手，后再用酒精棉擦試一遍,。

3. 花卉材料接種后放到培養(yǎng)室培養(yǎng),。培養(yǎng)室是花卉材料培養(yǎng)生長的場所,，一般幾到十幾平方米皆可。高度約2米左右,，空間小,，可節(jié)省控溫能源。培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)架上培養(yǎng),。培養(yǎng)架可有木材或金屬制成,，有4-5層，每層高40-50厘米,，日光燈裝在上方,。架長1.2米左右，與40瓦日光燈長一致,，寬80-90厘米,。每一層可裝兩支日光燈，這樣培養(yǎng)時的照度約為3000勒克斯,。培養(yǎng)室的溫度大多采取晝夜恒溫培養(yǎng),，保持在25℃±2℃，也有采取晝夜變溫培養(yǎng)的,，夜晚溫度可低些,，這應根據(jù)花卉生長需要而定。每天日光燈照明12-16小時,。

4. 花卉試管苗由于人工提供各方面*條件,，一般生長發(fā)育好，根系也多,，可往往由于沒掌握其特性,，造成移栽時成活率不高。這是因為試管苗在瓶中濕度很高的條件下培養(yǎng),，人為提供蔗糖等碳源,，花卉材料是處一起異養(yǎng)生活狀態(tài)，可以說比溫室生長的花卉還要嬌嫩得多,。而突然從瓶中移到土壤讓其過自養(yǎng)生活，往往由于變化太劇烈而造成損傷甚至死亡,。為此,，花卉試管苗開始移出時，仍應罩上玻璃瓶,，或蓋上薄膜袋（上開幾個小孔）,，1周后去掉。有噴霧條件則更理想,。開始7-10天要遮蔭,，以后逐漸見陽光,。移植基質(zhì)以沙與蛭石各半為好，要排水,、通風好,，隔一天澆一次營養(yǎng)液。這樣逐步鍛煉,，讓其適應環(huán)境,。2-3周后經(jīng)馴化鍛煉苗即可移至培養(yǎng)土中栽植。