ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗是目前臨床上zui常用的免疫學(xué)檢驗方法,，由于其試劑穩(wěn)定，易保存,，操作簡便,，結(jié)果判斷較客觀，既適宜于大規(guī)模篩查試驗,，又可用于少量標(biāo)本的檢測,，既可以做定性試驗也可以做定量分析，目前已廣泛用于微生物學(xué),、寄生蟲學(xué),、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子檢測等領(lǐng)域。那么你知道影響ELISA結(jié)果的因素有哪些嗎,？讓我們一起來看看吧,！

一,、樣品

樣品是檢測的前提，樣品質(zhì)量會直接影響實驗結(jié)果,?？梢杂肊LISA來檢測的樣品很多，根據(jù)檢測項目不同可以是血清,、血漿,、唾液、尿液等,，但大部分還是以血清為樣品,。作為血清樣品，應(yīng)避免溶血,，溶血可能會增加非特異性顯色,，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)誤差。

血清樣品的反復(fù)凍融會使血清中的抗體效價下降,，所以需要多次檢測的血清樣品,，如在5d內(nèi)檢測完，可4℃保存,，如需長時間檢測,，可進(jìn)行分裝凍存。樣品如被細(xì)菌污染腐敗,，可能會導(dǎo)致假陽性。

二,、溫度

溫度主要影響抗原抗體反應(yīng),，酶促反應(yīng)速度及非特異性吸附，溫度升高可使抗原抗體結(jié)合反應(yīng)加速,，但也易引起抗原抗體復(fù)合物的解離,。酶促反應(yīng)速度同樣隨溫度升高而增快，但是酶蛋白變性也加快,，喪失酶學(xué)活性,，降低酶的有效濃度而減慢反應(yīng)速度，溫度低時以前者為主,，高時以后者為主,。

溫度是質(zhì)量控制的一個重要方面，一般允許±1℃的誤差,。最好水浴,，微孔板浮在水面，使溫度迅速平衡,。如放溫箱內(nèi)溫育,，微孔板不應(yīng)疊置,，為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋,，盛放微孔板的濕盒應(yīng)是金屬的,，傳熱容易?？諠窈袘?yīng)預(yù)先放在溫箱中,，以平衡溫度，在室溫較低時更需要,。

三,、時間

在溫度保證的前提下，時間的控制至關(guān)重要,，尤其是底物顯色的時間控制,，顯色時間不足或過長會導(dǎo)致實驗不成立，無法對檢測結(jié)果進(jìn)行判斷,。

加人標(biāo)本,、試劑及混合的時間稱為操作時差。操作時差在每個試驗中都存在,，對結(jié)果或多或少有影響,。對手工操作，尤其是樣品量大的項目,，從加人第一個標(biāo)本到最后一個標(biāo)本,，需幾十分鐘，加人試劑及混勻存在很大的時間差異,，使抗原抗體和酶促反應(yīng)時間不一致,，易產(chǎn)生假陽性、假陰性結(jié)果,。

因此,，樣品過多時，請選擇分批操作,，對勿須更換移液口吸嘴的酶結(jié)合物,，底物的加樣可選擇8聯(lián)或12聯(lián)專用的多道加液器。亦可避免單孔滴加底物時遺漏多加,。

四,、試劑

試劑盒要根據(jù)要求進(jìn)行保存，并保證在有效期內(nèi)使用,，使用前應(yīng)平衡到室溫,。新購入的試劑盒要進(jìn)行校驗，檢查實驗是否成立，不同的試劑盒或不同批號的試劑不可混用,。

五,、其他

封板膜封閉不嚴(yán)或開啟時孔內(nèi)液體蒸發(fā)、震出可導(dǎo)致各孔相互污染,；操作時接觸到ELISA板底導(dǎo)致透光度改變,，影響酶標(biāo)儀測量結(jié)果；

加樣圖省事,，未認(rèn)真更換移液器吸頭,，認(rèn)為其帶入標(biāo)本殘留量小，不易影響結(jié)果,，是部分檢測人員常有的心理,。因此加標(biāo)本時必須認(rèn)真更換移移液器吸頭，防止移液器吸頭殘留痕量產(chǎn)生假陽性結(jié)果,。加樣時應(yīng)防止濺出污染其它標(biāo)本,。