如果在樣品分析時(shí)發(fā)現(xiàn)每個(gè)色譜峰都有雙峰出現(xiàn),，尤其在采用單一純物質(zhì)時(shí)，則可以確定是色譜柱出現(xiàn)問(wèn)題了,，一般是柱頭受損或者柱頭固定相污染引起的,。

如果進(jìn)樣量少，原來(lái)色譜柱正常,，色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰,，不一定拖尾，這一般應(yīng)是柱頭受堵，將色譜柱反過(guò)來(lái)接,，用流動(dòng)相沖洗或酸洗或其它溶劑,，將堵在柱頭的殘留物沖掉，再反過(guò)來(lái),，一般情況下就行了,。當(dāng)然不反沖，正沖有時(shí)也會(huì)正常的,。

如果峰拖尾,，雙峰強(qiáng)弱相差不大，柱頭固定相變臟或流失可能性更大,，這時(shí)可以將進(jìn)樣頭擰開(kāi),，將微孔濾片超聲，柱頭刮去一部分填料,，重新填上新填料擰緊,，不過(guò)這個(gè)對(duì)技術(shù)要求較高且不能經(jīng)常做，否則用不了幾次,，色譜柱就會(huì)應(yīng)柱效降低而報(bào)廢,。

如果上述不能解決問(wèn)題，可能是柱塌陷造成的,，此時(shí)需要更換色譜柱,。

目前HPLC分析多為反相色譜,，流動(dòng)相多為甲醇,、乙腈、水,，加各種添加劑以改善分離性能,。樣品一般用與流動(dòng)相相溶的溶劑溶解，最佳的溶解方法是用流動(dòng)相溶解,。在實(shí)際分析中,，有時(shí)候?yàn)榱藰悠返娜芙庑曰蚍€(wěn)定性加入了一點(diǎn)的緩沖液，緩沖液的酸堿性可能會(huì)導(dǎo)致樣品轉(zhuǎn)化,，從而產(chǎn)生雙峰現(xiàn)象,。此時(shí)需要更換緩沖液，調(diào)整溶劑pH值,，或者用流動(dòng)相配置樣品,。

此外，樣品要現(xiàn)配現(xiàn)用,，避免樣品溶解液的有機(jī)相比例,、pH值發(fā)生變化而導(dǎo)致的溶劑效應(yīng)。

當(dāng)用溶劑極性強(qiáng)度大的試劑，如純甲醇,、純乙腈,，純乙醇，而分析體系中以水為主時(shí),，如果樣品進(jìn)樣量大,，如定量管為20ul，此時(shí)單一的純物質(zhì)會(huì)出現(xiàn)雙峰,，第二峰比第一峰小(每次都不太一樣),，且拖尾，保留時(shí)間會(huì)提前(相對(duì)進(jìn)樣量少而言),，將進(jìn)樣量減少一半以上,，峰型將變?yōu)檎！＿@是樣品的溶劑與流動(dòng)相極性相差太大,，而流動(dòng)相來(lái)不及將其稀釋達(dá)到平衡造成的,，此情況下需要減少進(jìn)樣量。

另一個(gè)原因是,，進(jìn)樣量不一定大,，但絕對(duì)量很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起,，基本上齊高,，不拖尾(如果出峰很快，也可能是色譜柱問(wèn)題),。將樣品稀釋再進(jìn)樣就可以了,，這是由于進(jìn)樣量過(guò)大，色譜柱過(guò)載造成的,。

有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn),，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象，而這種互變異構(gòu)體無(wú)法分開(kāi),，而是以一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡存在,。在色譜分析時(shí)，在一個(gè)特定的條件下(如pH值,、流動(dòng)相極性,、溫度等)，一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰,，雙峰靠的很近,，基本齊高，不拖尾,，條件稍一變化,，尤其pH,，雙峰現(xiàn)象將消失，如紅霉素等,。

有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰,，但在LC-MS下，用質(zhì)譜檢測(cè)器,，其質(zhì)譜的總離子流圖上較明顯,，如農(nóng)藥啶蟲(chóng)瞇(吡蟲(chóng)清)。

體系pH值對(duì)色譜雙峰的影響出現(xiàn)在各個(gè)環(huán)節(jié)上(前面已經(jīng)提到),，尤其在緩沖液流動(dòng)相平衡過(guò)程中其影響更為明顯,。當(dāng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí)，受pH的連續(xù)變化影響會(huì)經(jīng)常遇到這種雙峰的情況,。另外,，在樣品分析時(shí)，流動(dòng)相的pH盡量遠(yuǎn)離被分析物的等電點(diǎn),，否則也容易引起雙峰的產(chǎn)生,。在用離子對(duì)試劑分析時(shí)，選擇不好條件也會(huì)容易引起雙峰的產(chǎn)生,。