一,、液相色譜柱選擇方法|液相色譜柱選擇的簡單思路

1.確定分離目的確定你的應(yīng)用是否要求高分離度,、短分析時(shí)間,、高靈敏度,、長柱壽命，低的操縱本錢等等,。

 2.評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)..諸如化學(xué)結(jié)構(gòu)、溶解性,、穩(wěn)定性等等,。

 3.選擇合適的色譜柱了解色譜填料的物理和化學(xué)性質(zhì)。

二,、液相色譜柱選擇方法|液相色譜柱選擇的條件

填料基質(zhì)

1.硅膠基質(zhì)：純度高本錢低,，強(qiáng)度大，化學(xué)修飾輕易,，但pH值范圍有限,。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定,，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。

2.聚合物基質(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬,，溫度穩(wěn)定(高溫可以達(dá)到80度以上),，機(jī)械強(qiáng)度小。

顆粒外形

大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒,，但有時(shí)是不規(guī)則的顆粒,。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動(dòng)相時(shí);不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對(duì)低廉的價(jià)格,。

顆粒粒徑

粒徑越小柱效越高,、分離度越高，但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致較高柱壓降,。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱,。

含碳量

含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān),。高含碳量進(jìn)步柱容量,、分辨率及分析時(shí)間，用于要求高分離度的復(fù)雜樣品;低含碳量分析時(shí)間短,、展現(xiàn)不同的選擇性,，用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動(dòng)相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等,。

孔徑和比表面積

HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒,，盡大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi)。因此,，分子必須進(jìn)進(jìn)孔內(nèi)才能被吸附和分離,。

孔徑和比表面積是相輔相成的兩個(gè)概念?？讖叫”缺砻娣e大,，反之亦然。比表面積大,，增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng),，增加保存,上樣量和復(fù)雜成分的分離度;比表面積小，平衡時(shí)間快,，適合梯度分析,。

孔容和機(jī)械強(qiáng)度

孔容，又稱“孔體積”,。指單位顆粒的空隙體積大小,。它能很好的反應(yīng)填料的機(jī)械強(qiáng)度。孔體積大的填料相對(duì)孔體積小的填料機(jī)械強(qiáng)度要略弱,?？左w積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜,。

封端封端

封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰,。不封端鍵合相相對(duì)封端鍵合相會(huì)產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品,。