流式細胞儀介紹大全
流式細胞儀工作原理
將待測細胞染色后制成單細胞懸液,。用一定壓力將待測樣品壓入流動室,不含細胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出,,鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度,,這樣,鞘液就能夠包繞著樣品高速流動,,組成一個圓形的流束,,待測細胞在鞘液的包被下單行排列,依次通過檢測區(qū)域,。
流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源,。經(jīng)過聚焦整形后的光束,,垂直照射在樣品流上,被熒光染色的細胞在激光束的照射下,,產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光,。這兩種信號同時被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收。光散射信號在前向小角度進行檢測,,這種信號基本上反映了細胞體積的大?。粺晒庑盘柕慕邮芊较蚺c激光束垂直,,經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,,形成多個不同波長的熒光信號。
這些熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度,,經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號,,再通過模/數(shù)轉(zhuǎn)換器,將連續(xù)的電信號轉(zhuǎn)換為可被計算機識別的數(shù)字信號,。計算機把所測量到的各種信號進行計算機處理,,將分析結(jié)果顯示在計算機屏幕上,液可以打印出來,,還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲在硬盤上以備日后的查詢或進一步分析,。
檢測數(shù)據(jù)的顯示視測量參數(shù)的不同由多種形式可供選擇。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形式表達,,其X軸為測量強度,,Y軸為細胞數(shù)目。一般來說,,流式細胞儀坐標軸的分辨率有512或1024通道數(shù),,這視其模數(shù)轉(zhuǎn)換器的分辨率而定。對于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù),,既可以單獨顯示每個參數(shù)的直方圖,,也可以選擇二維的三點圖、等高線圖,、灰度圖或三維立體視圖,。
細胞的分選是通過分離含有單細胞的液滴而實現(xiàn)的。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體,,充電后振動,,使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,待測定細胞就分散在這些液滴之中,。將這些液滴充以正負不同的電荷,,當液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時,在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn),,落入各自的收集容器中,,不予充電的液滴落入中間的廢液容器,,從而實現(xiàn)細胞的分離。