熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡不同，它不是通過普通光源的照明觀察標(biāo)本,，而是利用定波長的光(通常是紫外光,、藍(lán)紫光)激發(fā)顯微鏡下標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì),，使之發(fā)射熒光，所以,，熒光顯微鏡的光源所起的作用不是直接照明,，而是作為種激發(fā)標(biāo)本的內(nèi)熒光物質(zhì)的能源。我們之所以能觀察標(biāo)本,，不是由于光源的照明,，而是標(biāo)本內(nèi)熒光物質(zhì)吸收激發(fā)的光能后所呈現(xiàn)的熒光現(xiàn)象,。由此可知，熒光顯微鏡的特點,，主要是它的光源能供給大量特定波長范圍的激發(fā)光,，使受檢標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)能獲得必要強度的激發(fā)光,。同時，熒光顯微鏡必須具備相應(yīng)的濾光鏡系統(tǒng),。熒光顯微鏡是**熒光組織化學(xué)的基本工具,。它是由超壓光源,、濾片系統(tǒng)(包括激發(fā)和壓制濾板)、光學(xué)系統(tǒng)和攝影系統(tǒng)等主要部件組成,，是利用定波長的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光,。
1.激發(fā)熒光的方式：按光的波長范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線照明法)和BV激發(fā)法(使用藍(lán)紫光)兩種,。UV激發(fā)法是用短于400nm的近紫外光進行激發(fā),。該法不存在可見的激發(fā)光，所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光,，容易判別標(biāo)本上的特異熒光和背景組織的自身熒光,。
2.BV激發(fā)法：是以404nm,、434nm為中心的由紫外至藍(lán)光進行激發(fā)。該方法使用藍(lán)光照射標(biāo)本,，所以熒光觀察系統(tǒng)的截止濾光片必須使用可阻斷藍(lán)光并可充分通過所需綠,、黃熒光的濾光片,。用于熒光抗體法的熒光色素,。對于激發(fā)光的大吸收波長和熒光的大發(fā)光波長比較接近，所以BV激發(fā)法使用的濾光片必須使用銳截止式濾光片,。該法可用藍(lán)光作為激發(fā)光，所以熒光色素的吸收效率較,，可得到較明亮的圖像。其缺點是500nm以下的熒光無法看到,，而500nm以上的使整個圖像顯黃色,。在熒光抗體法中，大多以熒光色素有的顏色來判斷其特異性,，所以在討論微妙的特異性時，上述BV激發(fā)法的缺點往往影響大,。
