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尿素氮測(cè)試盒測(cè)定意義

尿素是生物體內(nèi)含氮化合物分解的終產(chǎn)物,，在尿酶催化下分解轉(zhuǎn)化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標(biāo)之一,。

測(cè)定原理

在堿性條件下,，尿酶水解尿素產(chǎn)生氨，氨與次氯酸反應(yīng)生成氯胺,，再與酚衍生物作用生成綠色吲哚酚,，在630nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平,、研缽,、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔板,、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶,，4℃保存,。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存,。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色）,，4℃避光保存。臨用前加入667μL無(wú)水乙醇,，蓋緊后充分混勻,，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存,。

試劑四：粉劑×1管,，4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水，充分溶解,。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶,，臨用前加10 mL蒸餾水，充分溶解,。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,，4℃避光保存。

測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到570 nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取EP管,，加入10μL蒸餾水,，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四,，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失）,，置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,，于570nm測(cè)定吸光值,，記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管,，加入10μL標(biāo)準(zhǔn)品，100μL試劑二,，100μL試劑三和10μL試劑四,，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min,，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,，于570nm測(cè)定吸光值，記為A標(biāo)準(zhǔn)管,。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完,。

4. 測(cè)定管：取EP管，加入10μL上清液,，100μL試劑二,，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失）,，置于沸水浴中保溫15 min,，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測(cè)定吸光值,，記為A測(cè)定管,。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完,。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次,。

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