果膠裂解酶測試盒是果膠酶的重要組成部分,，是一種能降解植物細胞壁，導致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶,，來源比較廣泛,，主要來源于微生物，可用于果汁,、果酒的澄清,，提高水果出汁率，植物病毒的純化,，紙漿的漂白和紡織品的生物精煉,，在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應(yīng)用價值。

果膠裂解酶測試盒

商品詳情：
測定意義：

 

果膠裂解酶(EC4.2.2.10)是果膠酶的重要組成部分,，是一種能降解植物細胞壁,，導致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶，來源比較廣泛,，主要來源于微生物,，可用于果汁、果酒的澄清,，提高水果出汁率,，植物病毒的純化，紙漿的漂白和紡織品的生物精煉,，在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應(yīng)用價值,。

測定原理：

 

果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵，生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸，在235nm處有特征吸收峰,。

 

自備實驗用品及儀器：

 

天平,、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀,、微量石英比色皿/96孔板,、恒溫水浴鍋。
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1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進行室溫勻漿，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min,；自來水冷卻后，8000g,，,，4℃離心10min，上清液置冰上待測,。

2.細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率20％或200W，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次）；8000g,，4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。

3.血清等液體：直接檢測,。

計算公式如下：

1、血清（漿）LAP活力的計算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2,、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V樣：加入樣本體積,，0.05 mL,；V樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應(yīng)時間,，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；2000：細菌或細胞總數(shù),，2000萬。

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注意事項：

1. 試劑盒中試劑三,、試劑四和標準品均需臨用前配制,，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢,。

2. 為保證實驗結(jié)果的準確性,，需先取1-2個樣做預(yù)實驗，如果測定的吸光值過高（高于2.5）,，用蒸餾水稀釋后再測定,。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰，因此,，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量,。

4．檢出限為100μmol/L。