ABI7500快速型實時定量PCR儀是特異性靶基因檢測與定量的一體化平臺,。7500將PCR熱循環(huán),,熒光檢測和各種應用分析軟件結合在一起,,可以動態(tài)觀察PCR每一循環(huán)各反應管中PCR擴增產(chǎn)物逐漸增加的情況,。PCR實驗結束后可以馬上得到定量結果,,無需凝膠電泳分析,,無需純化PCR產(chǎn)物,,無需進行任何實驗操作,。7500型實時熒光定量PCR儀采用96孔反應板或單個及8聯(lián)管,反應體積25-100微升,,實驗可以在不到2小時內(nèi)結束,。與其他人工基因定量分析方法如NorthernblottingorRNase-protectionassays相比,,7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)具有時間省,,靈敏度高,準確性好和線性范圍寬等優(yōu)點,。7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)由實時定量PCR技術的*—美國應用生物系統(tǒng)公司于2004年1月推出,,它質量優(yōu)異,實驗結果準確可信,,性能價格比極其*,。
實時定量PCR應用廣泛,包括基于相對定量分析的基因表達分析,,以標準曲線為基礎的病原體定量分析,,定性的PCR擴增后核酸序列的SNP基因型分析,以及以陽性內(nèi)對照為基礎的陽性/陰性結果判定
?五色熒光檢測,應用更廣泛全面,,包括:基因表達分析,,病原體定量分析,SNP基因型分析以及以陽性內(nèi)對照為基礎的陽性/陰性結果判定
?新型光路設計支持更多的熒光標記檢測,,包括:FAM?/SYBR?GreenI,VIC?/JOE,NED?/TAMRA?/Cy3?,ROX?/TexasRed?,和Cy5?;
更好的激發(fā)光源設計使長波長紅色熒光的檢測靈敏度大大提高
?強大而靈活的反應板設置指南軟件使反應板設置非常方便,,良好的實驗結果顯示與自動分析工具使實驗數(shù)據(jù)的分析處理更簡單直觀
?型半導體熱循環(huán)系統(tǒng)支持96孔板和單一0.2ml反應管。
?將來可以升級至超速定量PCR反應模式,,大大縮短定量PCR反應時間
?體積小,,采用手提電腦或臺式電腦,適用于任何空間的實驗室,。
快速熱循環(huán)
7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)的標準模式采用25-100微升反應體積,,可以采用96孔板或單管/8聯(lián)管進行實驗反應。另外7500還可以升級為快速熱循環(huán)樣品基座,,該升級為選購件,,由AB公司工程師負責安裝??焖贌嵫h(huán)樣品基座采用新型96孔反應板,,這種反應板的管內(nèi)液體上方的空間較小,可以支持5-30微升反應體積的實驗。采用樣品基座升級后的7500,,新型96孔反應板和新型快速熱循環(huán)定量PCR預混試劑,,實時定量PCR實驗可以在40分鐘內(nèi)完成,實驗效果與標準2小時模式**,。
7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)軟件采用WindowsXP?操作系統(tǒng),,進行儀器控制,數(shù)據(jù)收集和數(shù)據(jù)分析,,軟件功能強大,,界面友好,包括如下特色:
*反應板設置指南,,使實驗設計非常簡單,,即使是復雜的多重定量實驗也是如此。
*擴增反應曲線的實時監(jiān)測
*自動設定熒光基線,,自動計算熒光閾值使實驗結果分析大大簡化
*采用標準曲線進行靶基因的定量
*基因表達相對定量軟件提供強大的結果分析顯示,,可以自動將多達10塊96孔板基因表達實驗的數(shù)據(jù)同時分析,并自動去除無關項數(shù)據(jù),,該軟件為選購件
*自動SNP分型軟件以直觀的圖表輸出分型結果并自動進行分型質量評分
*解離曲線數(shù)據(jù)采集操作簡單觀察方便,,可以在儀器運行時觀察解離曲線數(shù)據(jù)
*觀察實時擴增曲線時可以非常方便的標定所對應的樣品孔位置
*光源使用時間監(jiān)測及儀器系統(tǒng)自我診斷程序
熒光信號檢測:
ABI7500快速型實時熒光定量PCR系統(tǒng)的全部96個樣品孔采用同一鹵鎢燈作為光源,鹵鎢燈光通過五色光源濾光片后激發(fā)每一個分析樣品,。鹵鎢燈光源增加光源濾光片后改善了長波長紅色熒光標記的激發(fā)效果,,可以大大提高紅色熒光檢測的靈敏度和定量分析的準確性。激發(fā)后的熒光再通過五色熒光濾光片到達CCD照相機檢測信號,。五色熒光濾光片能夠有效地分辨包括:FAM?/SYBR?GreenI,VIC?/JOE,NED?/TAMRA?/Cy3?,ROX?/TexasRed?和Cy5?在內(nèi)的多種熒光染料,。
儀器性能:
7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)經(jīng)過驗證可以達到如下性能目標:
?9個數(shù)量級的線性范圍
?可以檢測50ul反應體積單一報告熒光TaqMan實驗中僅10個起始拷貝數(shù)的模板,其置信度高達99.7%
試劑與消耗品:
7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)可使用全套定量PCR試劑與消耗品,,包括:TaqMan?PCR通用預混試劑,SYBR?GreenI預混試劑,96孔反應板及0.2ml反應管
TaqMan?Assays-on-Demand?andTaqMan?Assays-by-Design?應用試劑盒:
美國應用生物系統(tǒng)公司為7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)提供各種配套的TaqMan定量PCR應用試劑盒,這些試劑盒均經(jīng)過嚴格的質量控制,,可以拿來直接使用。