本產(chǎn)品僅用于科研,，不用于臨床

鴨胚胎肝間質(zhì)細胞永生化
細胞特性
1）來源：上海中科院動物研究所
2）含量：>5x105個/mL
3）污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性
4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1)準備鴨胚胎肝臟間充質(zhì)干細胞*培養(yǎng)基（dmem 高糖和F12培養(yǎng)基1：1搭配,，10%血清 ，1%雙抗以及1％自己配置的間質(zhì)細胞因子,。）,。
2)培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,，液氮儲存,。

二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4-5分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至6ml。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

鴨胚胎肝間質(zhì)細胞永生化
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2ml*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。

下面T25瓶為例,；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。
 

注意事項： 
1. 收到細胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,，請立即與我們,。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
*次處理細胞時,，在超凈工作臺中打開瓶蓋,，用浸透75%的酒精棉球擦拭瓶口外側，以防止溢出的培養(yǎng)基污染細胞,。
 

細胞介紹
間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是來源于早期中胚層的一類多能干細胞, 在體內(nèi)具有分布廣泛, 體外能夠大量擴增和免疫原性低等特點, 是一種細胞治療的理想種子細胞。自20世紀60年代,，F(xiàn)riedenstein等發(fā)現(xiàn)在人骨髓長期培養(yǎng)中, 存在一種形態(tài)類似成纖維細胞的貼壁生長的細胞且移植到小鼠體內(nèi)具有成骨能力和造血支持作用, 將這種細胞命名為骨髓基質(zhì)細胞(Bone marrow stromal cells, BMSCs),。到20世紀90年代末, 人們才成功分離一種具有成骨、成軟骨和成脂肪能力的細胞, 稱之為間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells, MSCs),。
隨后研究者也從其他組織, 如脂肪,、臍帶、胎盤,、肝臟,、骨實質(zhì)和肌肉等中成功分離獲得間充質(zhì)干細胞。作為一類成體干細胞中的間充質(zhì)干細胞, 目前大部分的研究集中在人及大鼠,、小鼠這兩種模式動物上, 其他動物的間充質(zhì)干細胞報道相對較少,。選取中國*家禽品種鴨子為實驗材料, 以鴨胚胎肝臟中的間充質(zhì)干細胞為研究對象, 對其進行分離培養(yǎng)鑒定, 進行增殖能力檢測及分化能力鑒定, 為家禽干細胞研究及畜禽遺傳資源保存提供借鑒及參考。鴨胚胎肝間質(zhì)細胞進行慢病毒轉染8-12h,，連續(xù)傳13代,，采用高濃度含嘌呤霉素培養(yǎng)基（4μg/mL）培養(yǎng)，篩選陽性克隆,；篩選出陽性永生化鴨胚胎肝間質(zhì)細胞,。
 

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇,；（2）存活細胞,，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供科研使用,。