酶標記抗體法染色的基本原理

酶標記抗體法和熒光素標記抗體法的原理類似,，分為直接法和間接法,，其原理基本相同，但敏感性不同,。

（一）直接法

直接法是將酶（如HRP）標記在特異性抗體（*抗體）上,，然后用酶標記抗體直接與相應原特異性結合，形成抗原—抗體—HRP復合物,，zui后用酶底物DAB-H202顯色。該法的優(yōu)點是簡單,、步驟少,，省時、特異性高,、非特異性染色輕：缺點是敏感性差,，因為一個抗原決定簇只結合一個HRP分子（假設一個抗體分子與一個HRP分子結合）。另外,，一種標記抗體也只能檢測一種抗原,。若要檢測多種抗原，就必須標記每一種特異抗體,，這樣既麻煩又不經濟,。目前此法很少應用，但在單克隆抗體制備過程中,，為了更特異地篩選單抗,，仍常用此法。

（二）間接法

間接法也稱夾心法,，是直接法的簡單改進,，將酶示蹤物標記在二抗上，再與*抗體（已與相應抗原反應形成復合物的IgG）反應,，然后進行顯色反應,。此法要求第二抗體與特異性抗體（一抗）應是不同種屬的動物產生,，如特異性抗體（一抗）是兔抗人IgG，酶標記抗體（二抗）則可以是羊抗兔抗體,。該法與直接法比較有以下優(yōu)點：

①應用面較寬,，僅標記一種二抗就可以檢測眾多相同的*抗體，例如眾多一抗為兔來源,，只要標記一種抗兔二抗就可用于所有抗兔一抗的檢測,，不需要對每種特異性抗體進行標記；
②敏感性增加,，*抗體的工作濃度在直接法的基礎上進一步稀釋,；
③可以商品化購置；
④可以設計各種對照,。
酶標記抗體法染色的基本原理