近期不少客戶向研域(上海)化學試劑業(yè)務員訴苦免疫組化中總呈現(xiàn)假陽性,，很是頭疼,。今日小編我特意給您們找來了以往總結(jié)的經(jīng)歷，希望能協(xié)助更多的科研朋友！
1. 消除病理性色素的影響：
  當所檢動物因為出血等原因構(gòu)成吞噬含鐵血黃素細胞增多時，為防止其與 DAB 顯色呈現(xiàn)的黃褐色發(fā)作混雜,，優(yōu)先選用AEC顯色劑。安排固定時刻過長時,，切片中簡單發(fā)作福爾馬林色素顆粒,，影響成果調(diào)查，選材時應充分用流水沖刷,，以消除影響,。
  切片制作不當引起的非特異性上色 在嚴峻變性、壞死及炎性病灶處,，在膠原纖維和結(jié)締安排部位,，在切片裱貼不平,、折皺處以及安排邊際部位常會呈現(xiàn)非特異性上色,。其間有的是因安排荷電狀況改動而吸附抗體,；有的機理不明；有的可能與安排邊際或皺折深部的槽形構(gòu)型有關(guān),，處理的辦法是在滴加一抗前,，以二抗動物的正常血清（ 5 %~10 %）關(guān)閉、飽滿電荷吸附位點和改善選材與制片技能,。
2. 清洗不充分而構(gòu)成的非特異性上色：
  應嚴厲操作規(guī)程,。緩沖液中含一定量的鹽，其有利于減低布景上色,，一般運用 0.05mlo/L PBS ,，溶液內(nèi)參加吐溫 20 ，效果更佳,。特別符號時,，試劑公司一般都供給緩沖液的配方。別的,，在清洗后至參加下一步試劑前,，不能干片，干片的部位會呈現(xiàn)非特異上色,。
  DBA顯色發(fā)作的某些布景顏色 運用濃縮型 DAB 試劑盒時,，請嚴格依照說明書標明的滴加次序操作，留意校正蒸鎦水的 pH 值,，以確保試驗成果的正確性,。粉劑 DBA 溶解時，常有一些不溶性顆粒,，這些顆粒須經(jīng)過濾除去,。不然可能堆積于切片安排上，發(fā)作斑駁狀上色,。別的,， DAB 保存不當發(fā)作氧化物亦可堆積于切片上，因而需將 DAB 保存于避光枯燥處,，現(xiàn)用現(xiàn)配,，臨用前加 H2O2。
3. 消除內(nèi)源酶的影響：
  在觸及免疫過氧化酶的各種染色中,，均用過氧化物酶來符號抗體,，酶的效果是催化底物，使顯色劑顯色,，正常安排中也含有一定量的過氧化物酶,，其相同也能催化底物顯色,，而影響免疫組化染色的特異性，因而在參加符號酶前應設(shè)法將其滅活,，以確保染色反響的特異性,。
  一般狀況下，去除內(nèi)源酶的辦法是先用 3%的過氧化氫溶液效果,，但在含有豐富血細胞的標本中,，因為血細胞中存在很多具有活性的過氧化物酶，能與過氧化氫發(fā)作激烈的反響,，發(fā)作氣泡而破壞安排結(jié)構(gòu)和細胞形狀,。在 OCT 包埋的冰凍切片中，運用 3%的過氧化氫化溶液亦會發(fā)作相似現(xiàn)象,。此刻可用 3%的過氧化氫甲醇溶液孵育 20 分鐘的辦法滅活內(nèi)源性酶,。
  滅活內(nèi)源酶對正確判別含血細胞較多的標本，如骨髓,、胎盤,、脾等的染色成果十分重要。相同,，正常細胞也含生物素,，尤以肝、脾,、腎安排含量為多,。在使用親和素試劑的染色中，內(nèi)源性生物素易結(jié)合后繼抗體,，構(gòu)成親和素（或鏈親合素） - 生物素復合物,，導致假陽性發(fā)作。消除這種非特異性上色的辦法,，是在選用生物素辦法染色前,，對標本進行親和素處理，使其結(jié)合位點飽滿,。
4. 消除非特異性布景上色：
  非特異性上色zui常見的狀況是蛋白質(zhì)（抗體）吸附到安排切片中高度荷電的膠原及結(jié)締安排成分上,，防止非特異性布景上色的辦法之一是在滴加一抗前在標本上加一種無關(guān)的蛋白質(zhì)溶液，關(guān)閉荷電點不給一抗留有吸附余地,，以確保一抗不會吸附到膠原纖維及結(jié)締安排成分上,。zui常用的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液是所用二抗的同種動物非免疫血清。用發(fā)作二抗的同種動物血清,，是為了防止二抗與預先參加的蛋白質(zhì)結(jié)合引起假陽性染色,。
  用來阻斷非特異性結(jié)合的血清不能有任何溶血現(xiàn)象。紅細胞破裂會使其間的過氧化酶與底物效果,，發(fā)作非抗原特異性的陽性上色,。多克隆抗體因其成分雜亂,，更易構(gòu)成布景染色。稀釋液選用含 1%BAS pH7.4 的 PBS ,，一起在洗液中參加 0.05%的吐溫 20 （ Tween20 ）有助于消除布景染色,。