研域（上海）化學(xué)試劑有限公司

小鼠單個核細胞分離一步梯度法去除死細胞

時間：2010-6-24閱讀：2363

基本原理

活細胞（密度較?。┖退兰毎芏容^大）密度不同，從而有助于將活的淋巴細胞和紅細胞分離,。

附加材料

高密度溶液：Ficoll-Paque（Ficoll和泛影酸鈉,；Pharmacia LKB）或Lympholyte-M（Cedarlane）

12ml或50ml聚丙烯離心管（比聚苯乙烯離心管好）

注：Ficoll-Paque和Lympholyte-M的密度與溫度有關(guān)；該方法中所采用的以及其他商品化的高密度溶液適合在室溫中使用,。因此應(yīng)注意使細胞懸液,、離心和高密度溶液控制在室溫。否則會因活細胞沉入離心管底導(dǎo)致在密度界面上損失活細胞。

實驗方案

1,、用RPMI-5*培養(yǎng)基混懸細胞,，分裝到離心管中使其細胞數(shù)達到0.5×10⁸～1×10⁸個細胞/2ml（12ml離心管）或1×10⁸～5×10⁸個細胞/5ml（50ml離心管）。

2,、用移液器吸取3ml（使用12ml離心管時）或5ml（使用50ml離心管時）高密度溶液,，將槍頭伸到離心管底，緩慢將高密度溶液加入細胞懸液下方,。

3,、室溫，800g離心15min,。為了取得好的分離效果,，將離心機的“brake”開關(guān)關(guān)掉。

4,、使用5ml移液器，沿高密度層表面緩慢移動移液器槍頭,，吸入漂浮在高密度層上方的活細胞,，盡量少收集高密度溶液。將活細胞移入另一管中,。

5,、加入RPMI-5*培養(yǎng)基（少量細胞加入10ml，細胞量較多時加入40ml）,，室溫,，200g離心10min。重復(fù)一次,。

6,、以適量培養(yǎng)基混懸細胞以便進行下一步操作。



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