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蛋白質的濃縮技術方法

時間:2010-6-23閱讀:1657

(一)濃縮膠濃縮法
濃縮膠是一種高分子網(wǎng)狀結構的有機聚合物,,具有很強的吸水性能,。每克干膠可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物質,,如水,、葡萄糖、蔗糖,、無機鹽等,,適宜濃縮10 000分子量以上的生物大分子物質。濃縮后,,蛋白質的回收率可達80%~90%,。比濃縮膠應用方便,直接加入被濃縮的溶液中即可,。必須注意,,濃縮溶液的pH值應大于被濃縮物質的等電點,否則在濃縮膠表面產(chǎn)生陽離子交換,,影響濃縮物質的回收率,。

(二)冷凍干燥濃縮法
這是濃縮蛋白質的一種較好的辦法,它既使蛋白質不易變性,,又保持蛋白質中固有的成分,。它是在冰凍狀態(tài)下直接升華去除水分。具體做法是將蛋白液在低溫下冰凍,,然后移置干燥器內(干燥器內裝有干燥劑,,如NaOH、CaCl2和硅膠等),。密閉,,迅速抽空,并維持在抽空狀態(tài),。數(shù)小時后即可獲得含有蛋白的干燥粉末,。干燥后的蛋白質保存方便,應用時可配成任意濃度使用,。也可采用凍干機進行冷凍干燥,。
(三)吹干濃縮法
將蛋白溶液裝入透析袋內,放在電風扇下吹,。此法簡單,,但速度慢,且溫度不能過高,,不要超過15℃,。
(四)超濾膜濃縮法
此法是利用微孔纖維素膜通過高壓將水分濾出,而蛋白質存留于膜上達到濃縮目的,。有兩種方法進行濃縮:一種是用醋酸纖維素膜裝入高壓過濾器內,,在不斷攪拌之下過濾;另一種是將蛋白液裝入透析袋內置于真空干燥器的通風口上,,負壓抽氣,,而使袋內液體滲出。
(五)凝膠濃縮法
選用孔徑較小的凝膠,,如SephadexG25或G50,,將凝膠直接加入蛋白溶液中。根據(jù)干膠的吸水量和蛋白液需濃縮的倍數(shù)而稱取所需的干膠量,。放入冰箱內,,凝膠粒子吸水后,通過離心除去,。

(六)透析袋濃縮法
利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用zui廣的一種,。將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋(無透析袋可用玻璃紙代替),結扎,,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蠟),、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可,。也可將吸水劑配成30%-40%濃度的溶液,,將裝有蛋白液的透析袋放入即可。吸水劑用過后,,可放入溫箱中烘干或自然干燥后,,仍可再用。


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