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當(dāng)前位置:研域(上海)化學(xué)試劑有限公司>>技術(shù)文章>>細(xì)胞培養(yǎng)基技術(shù)說明
在醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)研究中應(yīng)用廣泛的是外周血淋巴細(xì)胞,、皮膚或纖維細(xì)胞和各種能在體外長期生長的細(xì)胞系,。外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基具有時(shí)間短,、技術(shù)簡便、可重復(fù)取材等優(yōu)點(diǎn),,它在臨床染色體分析中使用廣泛,。體外培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基株可在培養(yǎng)過程中發(fā)生自發(fā)的或在外界作用下的轉(zhuǎn)化,成為細(xì)胞系,,也可直接建成細(xì)胞系,,細(xì)胞培養(yǎng)基系能在體外無取制的傳代和生長。細(xì)胞系通常具有非整倍體細(xì)胞和各個(gè)細(xì)胞的核型不相同特征,。但細(xì)胞克隆的細(xì)胞系其這一特征可以不明顯,。
細(xì)胞在體外培養(yǎng)中所需的條件與體內(nèi)細(xì)胞基本相同。
1,、無污染環(huán)境
培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細(xì)胞培養(yǎng)基生存的首要條件,。當(dāng)細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時(shí),與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力,,一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等,,可導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)基死亡。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中,,保持細(xì)胞生存環(huán)境無污染,、代謝物及時(shí)清除等,是維持細(xì)胞生存的基本條件,。
2,、恒定的溫度
維持培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基旺盛生長,必須有恒定適宜的溫度,。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃,,偏離這一溫度范圍,細(xì)胞培養(yǎng)基的正常代謝會受到影響,,甚至死亡,。培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力較對高溫強(qiáng),,溫度上升不超過39℃時(shí),細(xì)胞代謝與溫度成正比,;人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí),,即能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù),;在40-41℃1小時(shí),,細(xì)胞會普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復(fù),;41-42℃1小時(shí),,細(xì)胞培養(yǎng)基受到嚴(yán)重?fù)p傷,大部分細(xì)胞培養(yǎng)基死亡,,個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能,;當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)基全部死亡,。
3,、氣體環(huán)境
氣體是人體細(xì)胞培養(yǎng)基生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳,。氧氣參與三羧酸循環(huán),,產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中,。
二氧化碳既是細(xì)胞培養(yǎng)基代謝產(chǎn)物,,也是細(xì)胞培養(yǎng)基生長繁殖所需成分,它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的PH值,。大多數(shù)細(xì)胞的適宜PH為7.2-7.4,,偏離這一范圍對細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些,,在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長,。有資料顯示,原代羊水細(xì)胞培養(yǎng)PH6.8時(shí)zui適,。
細(xì)胞培養(yǎng)基液PH濃度的調(diào)節(jié)常用的為加NaHCO3的方法,,因?yàn)镹aHCO3可供CO2,但二氧易于逸出,,故適用于封閉培養(yǎng),,也起緩沖作用,有防止PH迅速變動(dòng)的特性而用于開放細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中,,其zui大優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的PH值,。
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