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在ELISA檢測試劑盒中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,,其中包括:使用ELISA檢測試劑盒進(jìn)行試驗(yàn)時(shí),,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,,有時(shí)本底較高,,說明有非特異性反應(yīng)。
固相載體的選擇:
許多物質(zhì)可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),,觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),,要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí),。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),,觀察陽性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。
注意以下事項(xiàng):
1.確定ELISA檢測試劑盒在有效期內(nèi),。
2.仔細(xì)閱讀說明書,。
3.按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積),。
4.標(biāo)本制備要規(guī)范,,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備,盡量分裝做備份,。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者,,注意低溫保存。
5.根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量,。
6.準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品,,如試管、吸頭,、移液器,、離心機(jī)等。
7.按說明書將所用試劑平衡至室溫,,配制所需試劑,。
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