這是一個逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點,。在其后加入的酶標(biāo)記抗休與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。這就是為什么ELISA試劑盒反應(yīng)總是需要一定時間的溫育,。保溫的方式除有的ELISA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外,，一般均采用水浴,，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中，ELISA試劑盒板底應(yīng)貼著水面,，使溫度迅速平衡,。為避免蒸發(fā),，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,，此時可讓反應(yīng)板漂浮在水面上,。

       在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后,?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育,，有人稱之為孵育,，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。但不宜采用更高的溫度,。抗原抗體反應(yīng)4C更為,，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜,，以形成*多的沉淀。但因所需時間太長,，

       在ELISA試劑盒中一般不予采用,。ELISA試劑盒屬固相免疫測定，抗原,、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會,，只有*貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。若用保溫箱,，ELISA試劑盒應(yīng)放在濕盒內(nèi),，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布,，后將ELISA試劑盒板放在濕紗布上,。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此,。無論是水浴還是濕盒溫育,，反應(yīng)板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡,。室溫溫育的反應(yīng),，操作時的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20~25℃,，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育,。室溫溫育時,，ELISA試劑盒只要平置于操作臺上即可。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,。為保證這一點,，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板同時測定,。