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想要得出正確結(jié)論我們就必須嚴(yán)格按照要求來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,尤其是相關(guān)注意事項(xiàng),。接下來為大家說一下ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng),。
ELISA試劑盒操作技巧:
1.操作前應(yīng)對(duì)試驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18 C~25℃),、反響孵育溫度和孵育時(shí)刻,、洗刷的次數(shù)等,要先檢查水育箱溫度,,ELISA試劑盒是否符合要求,。
2.正確運(yùn)用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑,避免刮擦包被板底部,。加樣過程中避免液體外濺,,血清殘留在反響孔壁上,加樣器吸頭要清洗潔凈,,避免污染,加樣次序要與說明書共同,,否則可導(dǎo)致成果錯(cuò)誤,,試驗(yàn)重復(fù)性差。
3.手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大,,洗刷次數(shù)不要超越說明書引薦的洗刷次數(shù),,洗液在反響孑L內(nèi)停留的時(shí)刻不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流,,形成孔問污染,,導(dǎo)致假陰性或假陽性,。
4.要確保加液量共同 咱們?cè)谶\(yùn)用時(shí)感覺滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量禁絕,,形成顯色不統(tǒng)一,,判別錯(cuò)誤。
5.顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下,,加顯色系統(tǒng)后要避光反響,,顯色液量不能過多,以免顯色過強(qiáng),。
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,,計(jì)算時(shí)請(qǐng)*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
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