BAS酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)材料和方法
（以篩選抗空腸彎曲菌共同抗原的單克隆抗體為例）

1 材料
（1） 空腸彎曲菌共同抗原提取物,，自制。 BAS酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)材料和方法
（2） 生物素化羊抗鼠IgG（BSAMG）,，衛(wèi)生部上海生物制品所。
（3） ABC試劑,，衛(wèi)生部上海生物制品所,。如ABC試劑需自己配制，可按說明要求,，將親和素與酶標(biāo)生物素按一定比例混合,，置37℃孵育30min后使用。
（4） 被檢雜交瘤培養(yǎng)物上清液,。
（5） 其他試劑及器材同常規(guī)ELISA法,。 BAS酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)材料和方法

2 方法ABCELISA間接法程序
（1） 用包被液對(duì)空腸彎曲菌共同抗原提取物作適當(dāng)稀釋（1∶16），加入反應(yīng)孔中,，每孔01ml,，置4℃包被過夜或37℃1～2h。
（2） 用洗滌液洗滌2次,，每次1min,，瀝干,。
（3） 加入雜交瘤培養(yǎng)物上清液，每孔01ml,。同時(shí)作BALB/C小鼠免疫血清（陽性）及正常血清和培養(yǎng)液（陰性）對(duì)照,，置37℃1～2h。 BAS酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)材料和方法
（4） 洗滌3次,，方法同上,。
（5） 用保溫液對(duì)生物素化羊抗鼠IgG作適當(dāng)稀釋（1∶400～1∶1000），加入反應(yīng)孔中,，每孔01ml,。置37℃孵育1h。
（6） 洗滌3次,，方法同上,。
（7） 用ABC稀釋液或保溫液對(duì)ABC試劑作適當(dāng)稀釋（1∶100），加入反應(yīng)孔中,，每孔01ml,。置37℃孵育30min。 BAS酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)材料和方法
（8） 洗滌3次,，方法同上,。
（9） 加入鄰苯二胺底物溶液，每孔01ml,，置暗盒內(nèi)室溫顯色適當(dāng)時(shí)間（30min）,。
（10） 加入2mol/L H2SO4，每孔005ml,，終止反應(yīng),。用酶聯(lián)檢測(cè)儀檢測(cè)結(jié)果，并記錄其OD值,。

3 結(jié)果判定以P/N≥2為陽性,，或根據(jù)自定標(biāo)準(zhǔn)判定。
BAS酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)材料和方法
4 注意事項(xiàng)
1 ABCELISA中各要素的*反應(yīng)條件需經(jīng)篩選后確定,，不能照搬常規(guī)ELISA的反應(yīng)條件,。
2 ABCELISA對(duì)抗原和抗體（或免疫血清）的質(zhì)量要求高，否則可造成較高的本底或背景顯色,。