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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司

ELISA試劑盒的由來和實(shí)驗(yàn)原理

時(shí)間:2021-10-28閱讀:2915

ELISA試劑盒在國內(nèi)有很多種叫法,,大致分為:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit,、酶聯(lián)免疫試劑盒,、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒,、酶免試劑盒等,,其中比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等,。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,,得到所有科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展,。


Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法,。由于其試劑穩(wěn)定,、易保存,操作簡便,,結(jié)果判斷較客觀等因素,,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV) IgM 抗體ELISA檢測,。

ELISA試劑盒

免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),,所以任何的診斷試劑離不開的原料,如抗原抗體,,酶等,。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備,。


近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,,各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。

HBsAg試劑特點(diǎn)(檢測模式:臨床抗體夾心法):包被抗體為山羊多抗,。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位,,可測得HBsAg變異樣品,,提高檢測的特異性(99.98%)提高檢測的靈敏度,應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(PEI)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品,,對ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml



ELISA試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù),,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3,。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗體,,這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合,,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份,。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物,,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會(huì)與次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,,加入TMB底物溶液,,在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng),只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化,,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),,并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。

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