通常我們?cè)谶M(jìn)行Elisa試劑盒的實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,，需要注意一些問(wèn)題,，例如溫育,、顯色,、包被等。其中,，包被是需特別注意的一個(gè)問(wèn)題,，直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的效果,。那么在實(shí)驗(yàn)的時(shí)候包被要注意哪些問(wèn)題呢？

   首先我們要知道什么是包被,。

   在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)將抗原或抗體固定在過(guò)程稱(chēng)為包被(coating),。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用,。這種物理吸附是非特異性的,，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn),、濃度等的影響,。

   大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面,。不易吸附的非蛋白質(zhì)抗原可用間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,。

   親和素生物素  即用親和素先包被載體,，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻,、牢固,，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。脂類(lèi)物質(zhì)無(wú)法與固相載體結(jié)合,，可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中,，開(kāi)蓋置冰箱過(guò)夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后,，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面,。

   優(yōu)點(diǎn)：試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善,，重復(fù)性亦佳,?？乖昧可?，僅為直接包被的1/10乃至于/100。

   其次包被主要用哪些,。

   1,、包被用抗原。

   天然抗原,、重組抗原和合成多肽抗原三大類(lèi),。合成多肽抗原是抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。一般只含有一個(gè)抗原決定簇,，純度高,，特異性也高,，但由于分子量太小，往往難于直接吸附于固相上,。借助于偶聯(lián)物與固相載體的吸附,，間接地結(jié)合到固相載體表面。

   2,、包被用抗體

   IgG對(duì)聚苯乙烯有強(qiáng)吸附力,，其聯(lián)結(jié)發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外,。取材于抗血清或含單克隆抗體的培養(yǎng)液.須除去雜抗體后才能用于ELISA,，以保證試驗(yàn)的特異性。

   腹水中單抗的濃度較高,，特異性亦較強(qiáng),，因此不需要作吸收層析處理，直接包被,。在某些情況下,，用多種單抗混合包被，可取得更好的效果,。

   后包被需要哪些條件,。

   pH9.6碳酸鹽緩沖液

   pH7.2的磷酸鹽緩沖液

   pH7-8的Tris-HCL緩沖液

   加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置過(guò)夜,，37℃中保溫2小時(shí),。包被濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化，每批材料需通過(guò)實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定,。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為10ng/ml-20ug/ml,。