Elisa生物試驗是一種敏感性高,，特異性強,，重復性好的實驗診斷方法,。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,，操作簡便,，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中,。Elisa試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測,。

Elisa試劑盒的操作方法：

雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,，4℃ 過夜,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘。(簡稱洗滌,，下同),。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時,。然后洗滌,。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔),。

3. 加酶標抗體：于各反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時,，洗滌,。

4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。

5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml,。

6. 結果判定：Elisa試劑盒可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強,，陰性反應為無色或較淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。

間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml,，4℃過夜,；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,；

4.(同時做空白,、陰性及陽性孔對照)于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標二抗體(抗抗體)0.1ml,；

5.37℃孵育35-60分鐘,，洗滌；

6.’用DDW洗滌,。