建立PCR-RFLP-SSCP及測序方法，用于分析霍亂弧菌腸毒素AB（ctx-AB）基因多態(tài)性,。針對ctx-AB基因設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增片段為528bp，包括ctx-B編碼基因375bp,，引物序列為5′-GGT GTA AAA TTC CTT GAC G-3′和5′-GGT TCG ATG ATG AGA AGC-3′,。PCR產(chǎn)物經(jīng)RsaⅠ酶切為317bp和211bp 2個(gè)片段,。對酶切產(chǎn)物進(jìn)行單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）分析,，銀染色法顯示結(jié)果,。對不同SSCP類型測序,，利用PCR方法直接對PCR產(chǎn)物測序,。

　　霍亂弧菌O1群古典型（CVC）標(biāo)準(zhǔn)株569B和16017，埃爾托型（EVC）標(biāo)準(zhǔn)株919,，O139群標(biāo)準(zhǔn)株MO45，EVC80株（廣東省90年代病人分離株），O139群10株（廣東省90年代病人分離株）,，由廣東省和廣州市衛(wèi)生防疫站提供,。PCR擴(kuò)增ctx-AB基因,，上述菌株均產(chǎn)生1條約528bp的片段,，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)RsaⅠ內(nèi)切酶消化后,，在2%瓊脂糖凝膠上電泳,，均可見1條約317bp的片段和1條約211bp的片段。酶切產(chǎn)物經(jīng)SSCP分析，分為A和B兩個(gè)類型,，CVC,、EVC和O139群標(biāo)準(zhǔn)株均為A型,，80株EVC（廣東省分離株）中8株為A型，其余為B型,；O139群（廣東省分離株）均為A型,。進(jìn)一步測序表明兩類型基因序列有3個(gè)位點(diǎn)不同，以ctx-B基因的起始堿基定位為1,，其下游序列為正,，上游序列為負(fù),，兩類型在103、115和203位點(diǎn)堿基不同,，A型為A,、C和C（相應(yīng)位點(diǎn)編碼的氨基酸為Asp、Tyr和Ile）,，B型為G,、T和T（相應(yīng)位點(diǎn)編碼的氨基酸為Asn、His和Thr）,。與基因庫中霍亂弧菌的ctx-AB基因序列比較,，B型103位點(diǎn)與國外報(bào)道的序列均不同，可能為廣東地區(qū)菌株*的突變,。PCR-RFLP-SSCP及測序方法快速,、簡便、準(zhǔn)確,、經(jīng)濟(jì),，適用于對大量標(biāo)本某重要基因多態(tài)性的研究