建立PCR-RFLP-SSCP及測序方法,，用于分析霍亂弧菌腸毒素AB（ctx-AB）基因多態(tài)性,。針對ctx-AB基因設(shè)計引物,，擴增片段為528bp,，包括ctx-B編碼基因375bp，引物序列為5′-GGT GTA AAA TTC CTT GAC G-3′和5′-GGT TCG ATG ATG AGA AGC-3′,。PCR產(chǎn)物經(jīng)RsaⅠ酶切為317bp和211bp 2個片段,。對酶切產(chǎn)物進行單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）分析，銀染色法顯示結(jié)果,。對不同SSCP類型測序,，利用PCR方法直接對PCR產(chǎn)物測序。

　　霍亂弧菌O1群古典型（CVC）標準株569B和16017,，埃爾托型（EVC）標準株919,，O139群標準株MO45，EVC80株（廣東省90年代病人分離株）,，O139群10株（廣東省90年代病人分離株）,，由廣東省和廣州市衛(wèi)生防疫站提供。PCR擴增ctx-AB基因,，上述菌株均產(chǎn)生1條約528bp的片段,，擴增產(chǎn)物經(jīng)RsaⅠ內(nèi)切酶消化后，在2%瓊脂糖凝膠上電泳,，均可見1條約317bp的片段和1條約211bp的片段,。酶切產(chǎn)物經(jīng)SSCP分析，分為A和B兩個類型,，CVC,、EVC和O139群標準株均為A型，80株EVC（廣東省分離株）中8株為A型,，其余為B型,；O139群（廣東省分離株）均為A型。進一步測序表明兩類型基因序列有3個位點不同,，以ctx-B基因的起始堿基定位為1,，其下游序列為正，上游序列為負,，兩類型在103,、115和203位點堿基不同，A型為A,、C和C（相應(yīng)位點編碼的氨基酸為Asp,、Tyr和Ile）,，B型為G、T和T（相應(yīng)位點編碼的氨基酸為Asn,、His和Thr）,。與基因庫中霍亂弧菌的ctx-AB基因序列比較，B型103位點與國外報道的序列均不同,，可能為廣東地區(qū)菌株*的突變,。PCR-RFLP-SSCP及測序方法快速、簡便,、準確,、經(jīng)濟，適用于對大量標本某重要基因多態(tài)性的研究