人成纖維細(xì)胞生長因子23（FGF-23）ELISA試劑盒僅供研究使用

實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測(cè)定標(biāo)本中人胃蛋白酶原A（PGA）水平。用純化的人胃蛋白酶原A（PGA）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的胃蛋白酶原A（PGA）標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的胃蛋白酶原A（PGA）待檢樣品，溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體,，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,，形成免疫復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的,。顏色的深淺和樣品中的胃蛋白酶原A（PGA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人胃蛋白酶原A（PGA）濃度,。
試劑盒組成

1
 20倍濃縮洗滌液
 50ml×1瓶
 
 
9
 標(biāo)準(zhǔn)品S1（120μg/L）
 0.5ml×1瓶
 
2
 鏈霉親和素-HRP
 6ml×1瓶
 標(biāo)準(zhǔn)品S2（80μg/L）
 0.5ml×1瓶
 
3
 酶標(biāo)包被板
 12孔×8條
 標(biāo)準(zhǔn)品S3（40μg/L ）
 0.5ml×1瓶
 
4
 生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體
 6ml×1瓶
 標(biāo)準(zhǔn)品S4（20μg/L ）
 0.5ml×1瓶
 
5
 顯色劑A液
 6ml×1瓶
 標(biāo)準(zhǔn)品S5（10μg/L）
 0.5ml×1瓶 
 
6
 顯色劑B液
 6ml×1/瓶
 10
 密封袋
 1個(gè)
 
7
 終止液
 6ml×1瓶
 11
 封板膜
 3張
 
8
 樣品稀釋液
 6ml×1瓶
 12
 說明書
 1份
 

 
標(biāo)本要求
1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟
1.       根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。
2.       加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測(cè)樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測(cè)樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育45分鐘,。
3.       配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.       洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次,，拍干,。
5.       加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘

6.       洗滌：操作同4,。

7.       加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
8.       洗滌：操作同4,。

9.       顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.   終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）,。

11.   測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

 
計(jì)算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。

注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4．  如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值）,，請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）,。

5．  封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。顯色劑B請(qǐng)避光保存,。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn),。

線形范圍：
5μg/L -150μg/L
規(guī)格：
96人份/盒

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個(gè)月

ELISA試劑盒