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1. 實驗部分

Shimadzu LC-40B X3高效液相色譜儀,；

色譜柱：Shim-pack Scepter C4-300（5 μm,，4.6×250 mm；P/N：227-31183-06）

純水機：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）

SHIMSEN Disc HPTFE針式過濾器（P/N：380-00341）,；

低吸附PP樣品瓶SHIMSEN Vial（P/N：380-00509）,；

Nichipet Air移液槍：Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；

Nichipet Air 10-100 μL（P/N：00-NAR-100）,；

Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000）,；

Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-10000）。

取牛乳鐵蛋白標準品50 mg,，用水溶解配置標準儲備液（5.0 mg/mL）,。取標準儲備液1 mL，用磷酸鹽緩沖液Ⅰ定容至10 mL,，制成標準中間液體（0.5 mg/mL）,，臨用現(xiàn)配。

準確移取上述牛乳鐵蛋白標準中間溶液,，用磷酸鹽緩沖液Ⅰ稀釋定容,，配制成濃度分別為1.0 μg/mL、5.0 μg/mL,、10.0 μg/mL,、50.0 μg/mL、100.0 μg/mL 和200.0 μg/mL的標準系列工作液,，臨用現(xiàn)配,。

注：乳鐵蛋白易被玻璃樣品瓶吸附，建議使用低吸附PP樣品瓶,；低濃度點（1.0 μg/mL,、5.0 μg/mL）需現(xiàn)配現(xiàn)進樣。

微孔濾膜可能會導致目標化合物吸附,，樣品不建議過膜,。

色譜柱：Shim-pack Scepter C4-300（5 μm，4.6×250 mm,；P/N：227-31183-06）

流 速：1.0 mL/min

進樣量：50 μL

柱 溫：30 ℃

檢測器：280 nm

流動相：A：0.1%三氟乙酸溶液

B：乙腈

梯度程序如下：

2. 實驗結果

按照上述色譜條件（1.3）進行采集,，色譜圖如下：

注：首次使用Shim-pack Scepter C4-300 色譜柱時，可能出現(xiàn)響應低（低濃度點甚至不出峰）、峰形不對稱的情況,，需對色譜柱進行鈍化處理（即使用0.5 mg/mL 的標品進樣100 μL）,，鈍化后連續(xù)進空白溶劑直至無乳鐵蛋白目標峰后，再進行分析,。

3. 結論

本文建立了食品中乳鐵蛋白的HPLC 測定方法,。參考GB 5009.299-2024 中的色譜條件，采用色譜柱Shim-pack Scepter C4-300 分析乳鐵蛋白,，結果顯示,，乳鐵蛋白峰型對稱，重現(xiàn)性良好,，滿足檢測要求,。此方法可為食品中乳鐵蛋白的測定提供參考。