冬日里溫暖的竹蔗茅根水,，暖手暖心，夏日里冰鎮(zhèn)的青瓜甘蔗汁,，口感清甜——不過在品嘗這份清甜的同時(shí),，在選料時(shí)也要警惕霉變的“紅心”甘蔗。俗話說“清明蔗,，毒過蛇”,，經(jīng)歷幾個(gè)月的運(yùn)輸、存儲(chǔ)過程,，久儲(chǔ)的甘蔗可能存在真菌污染和霉變風(fēng)險(xiǎn),。作為強(qiáng)烈的嗜神經(jīng)毒素，3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid, 3-NPA)常見于霉變的甘蔗中,，是由節(jié)菱孢霉菌和米曲霉菌等產(chǎn)生的毒性代謝物,，LD50為50mg/kg。患者食用霉變甘蔗,，會(huì)引起嘔吐,、腹瀉甚至抽出、昏迷,，嚴(yán)重者可發(fā)生腦缺血性壞死,，呼吸衰竭甚至死亡，重癥中毒患者還可能留有語言,、運(yùn)動(dòng)障礙等后遺癥,。
本文參考BJS 202205《甘蔗及甘蔗汁中3-硝基丙酸的測定》，樣品經(jīng)提取后,，采用Shim-pack GIST C18-AQ色譜柱(1.9μm, 2.1mm×100mm, PN: 227-30807-02),，LCMS-8050三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀進(jìn)行測定，空白樣品中高,、中,、低三個(gè)濃度水平的加標(biāo)回收率在82.0~85.7%。該方法可為甘蔗及甘蔗汁中3-硝基丙酸的測定提供參考,。
實(shí)驗(yàn)部分
1.1 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材
Shimadzu LC-30AD 與 LCMS-8050 聯(lián)用系統(tǒng),；
色譜柱：Shim-pack GIST C18-AQ（1.9 μm， 2.1× 100 mm,；P/N：227-30807-02）,；
SHIMSEN Disc HPTFE 針式過濾器（ P/N：380-00341）；
LC/MS 認(rèn)證樣品瓶 LabTotal Vial（ P/N：227-34001-01）,；
SHIMSEN Pipet 移液槍：SHIMSEN Pipet PMII-10（ P/N：380-00751-02）,；
SHIMSEN Pipet PMII-100（ P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（ P/N：380-00751-06）,。
1.2 分析條件
UHPLC 條件
色譜柱：Shim-pack GIST C18-AQ（1.9 μm,，2.1× 100 mm；P/N：227-30807-02）,；
流 速：0.2 mL/min
進(jìn)樣量：5 μL
柱 溫：30 ℃
流動(dòng)相：A：0.1%甲酸水溶液 B：甲醇
質(zhì)譜條件
離子化模式：ESI,，負(fù)離子掃描 掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測 (MRM)
碰撞氣：氬氣
加熱氣：空氣，10 L/min
霧化氣：氮?dú)猓? L/min
干燥氣：氮?dú)猓?0 L/min
接口溫度：300℃
DL 溫度：250 ℃
加熱模塊溫度：400 ℃
接口電壓：-2.0kV
各化合物 MRM 參數(shù)見下表
1.3 樣品前處理(制樣及提取)
固體樣品(甘蔗)：取20g以上去皮甘蔗,，切段,，再切成小于0.5cm的小塊，攪碎混勻,，置于潔凈容器中密閉,。
液體樣品(甘蔗汁)：充分混勻,，直接取用
提?。悍Q取2g試樣于50mL離心管中，加水10mL，超聲提取10min,，用磷酸調(diào)pH至20.±0.1,，加入10mL乙酸乙酯，渦旋1min,，10000rpm離心5min,，上清液移出備用。重復(fù)上述提取步驟1次,，合并上清液,，45℃氮吹近干，水定容至1.0mL,，過0.22μm微孔濾膜,，上機(jī)測定。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的 MRM ?譜圖
基質(zhì)標(biāo)液MRM色譜圖(10 ng/mL)
2.2 樣品測試和添加回收結(jié)果
將空白樣品進(jìn)行高,、中,、低三個(gè)濃度水平加標(biāo)，按照上述前處理方法處理后上機(jī),， 結(jié)果顯示,，加標(biāo)回收率為 82.0-85.7%，詳細(xì)數(shù)據(jù)見下表：
樣品及樣品加標(biāo)MRM譜圖
——空白樣品(黑色),；樣品加標(biāo)(粉色,，5μg/mL)
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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