液相色譜柱都是按照嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)和測(cè)試的,如能按照以下信息使用和維護(hù)色譜柱,,不但能得到更佳的檢測(cè)結(jié)果,,更能夠延長色譜柱的使用壽命。
色譜柱的安裝:
a,、拆開柱包裝盒,,確認(rèn)色譜柱的類
型、尺寸,、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑,。
b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用,。
c,、按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向,將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許,,建議在柱前使用保護(hù)柱),;柱的出口與檢測(cè)器連接。連接管是外徑為1.57mm,、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管,。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積,。連接管通過空心螺釘,、壓環(huán)后盡量用力插到底,然后順時(shí)針擰緊空心螺釘,,直到擰不動(dòng)為止,,再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1/4-1/2圈,切記不要用力過大,。如色譜柱通過流動(dòng)相加壓后有漏液現(xiàn)象,,請(qǐng)用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1/4圈,直至不漏液為止,。
色譜柱在使用前,,*好進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來,,作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考,。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相,、柱溫等條件的差異而有所不同,;另外,在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是*佳條件),,只有這樣,,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。
1,、樣品的前處理
a,、*好使用流動(dòng)相溶解樣品。
b,、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì),。
c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì),。
2,、流動(dòng)相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
a,、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長時(shí)間保留在柱中)。
b,、流動(dòng)相具有一定惰性,,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
c,、流動(dòng)相的黏度要盡量小,,以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降,,延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度),。
d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng),。如使用UV檢測(cè)器,,*好使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
e,、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行,。
f,、在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),,還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
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