液相色譜柱是在高純硅膠基質(zhì)上鍵合更具通用性的C18官能團(tuán)的色譜柱，專(zhuān)研的封尾技術(shù)使得色譜柱對(duì)離子化的化合物幾乎無(wú)吸附,。
一,、色譜柱的選擇
在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì),，他們的類(lèi)型結(jié)構(gòu),、極性、酸堿性,、分子量大小等等,。
1.樣品是極性的且弱酸性的；就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測(cè),，即要選擇承受100%純水且對(duì)極性化合物保留很好的色譜柱
2. 如果樣品極性太強(qiáng),，或酸性太強(qiáng)；可以選擇CN,，NH2,，或硅膠柱，HILIC（親水色譜）,，也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱（缺點(diǎn)是離子對(duì)試劑平衡時(shí)間長(zhǎng),，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否 則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn),，另外離子對(duì)試劑很難洗下來(lái),，基本上用了離子對(duì)的色譜柱就不能再用于其它實(shí)驗(yàn)）
3. 若樣品是堿性的；可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質(zhì),，且硅膠端基封尾）或一些經(jīng)過(guò)修飾的C18柱（如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等）,，他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾,，一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做，因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留
液相色譜儀基質(zhì)的選擇大致遵循以下法則,，硅膠基質(zhì)的填料被用于大部分的HPLC分析,，尤其是小分子量的被分析物，聚合物填料用于大分子量的被分析物質(zhì),，主要用來(lái)制成分子排阻和離子交換柱,。
色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測(cè)試,，并將結(jié)果保存起來(lái),，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是最佳條件),，只有這樣,，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動(dòng)相,、柱溫等條件的差異而有所不同。
二,、色譜柱的維護(hù)
1.色譜柱的平衡
反相色譜柱由工廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的,。新柱應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請(qǐng)一定確保您分析樣品所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶,。每天用足夠的時(shí)間以流動(dòng)相來(lái)平衡色譜柱,，您就會(huì)在處理問(wèn)題方面獲得最大的"補(bǔ)償"，
2.色譜柱的再生
長(zhǎng)期使用的色譜柱,，往往柱效會(huì)下降(柱子的理論塔板數(shù)減低),。可以對(duì)色譜柱進(jìn)行再生,，在有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用一個(gè)廉價(jià)的泵進(jìn)行柱子的再生,。
建議用來(lái)沖洗柱子的溶劑體積
3.色譜柱的維護(hù)
a.使用預(yù)柱保護(hù)分析柱(硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度)
b.大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5，盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍
c.避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化
d.流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理
e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相,，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈,，并保存于甲醇或乙腈中
f.氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意,，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類(lèi)溶劑,，以避免腐蝕。
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