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液相色譜柱想要得到高效率,,還要注意這些,!

閱讀:633      發(fā)布時間:2022-2-23
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液相色譜是一種高效的分析手段,液相色譜柱是色譜分析系統(tǒng)的“心臟”,。柱效受柱內(nèi)外因素影響,,為使色譜柱達到最佳效率,除柱外死體積要小外,,也要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù),。

1.柱的構(gòu)造

色譜柱由柱管、壓帽,、卡套(密封環(huán)),、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成,。柱管多用不銹鋼制成,,壓力不高于70Kg/cm2時,也可采用厚壁玻璃或石英管,,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度,。為提高柱效,減小管壁效應(yīng),,不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光,。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度,其效果與拋光相同還有使用熔融硅或玻璃襯里的,,用于細管柱,。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板,是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金,,孔徑0.2-20um(5-10um),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出,,柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長、填料粒徑和折合流速來確定,,目的是為了避免管壁效應(yīng),。

2.柱的發(fā)展方向

因強調(diào)分析速度而發(fā)展出短柱,柱長3~10cm,,填料粒徑2~3um,。為提高分析靈敏度,與質(zhì)譜(MS)聯(lián)接,,而發(fā)展出窄徑柱,、毛細管柱和內(nèi)徑小于0.2mm的微徑柱(MICROBORE)。細管徑柱的優(yōu)點是:①節(jié)省流動相,;②靈敏度增加,;③樣品量少;④能使用長柱達到高分離度,;⑤容易控制柱溫,;⑥易于實現(xiàn)LC-MS聯(lián)用。

但由于柱體積越來越小,,柱外效應(yīng)的影響就更加顯著,,需要更小池體積的檢測器(甚至采用柱上檢測),更小死體積的柱接頭和連接部件,。配套使用的設(shè)備應(yīng)具備如下性能:輸液泵能精密輸出1~100ul/min的低流量,,進樣閥能準確、重復地進樣微小體積的樣品,。且因進樣量小,,要求高靈敏度檢測器,,電化學檢測幫質(zhì)譜儀在這方面具有突出優(yōu)點。

3.柱的填充

色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外,,還與填充技術(shù)有關(guān),。在正常條件下,,填料粒度>20um時,,干法填充制備柱較為合適;顆粒<20um時,,濕法填充較為理想,。填充方法一般有四種:①高壓勻漿法,多有用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充,;②徑向加壓法,;③軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱,;④干法,,柱填充的技術(shù)性強,大多數(shù)實驗室使用己填充好的商品柱,。

須指出,,高效液相色譜柱的獲得,裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié),,但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣,,以及配套的色譜儀系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)是否合理。
 

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