質(zhì)粒小量快速提取試劑盒

Rapid Mini Plasmid Kit

產(chǎn)品信息：

保存條件：本試劑盒在室溫儲存 18 個月不影響使用效果,。

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒采用改進 SDS-堿裂解法裂解細胞，離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高

鹽,、低pH 值狀態(tài)下選擇性地結合溶液中的質(zhì)粒 DNA,，再通過漂洗液將雜質(zhì)和

其它細菌成分去除，后低鹽,、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒 DNA 從硅

基質(zhì)膜上洗脫,。

產(chǎn)品特點：：

1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極

小,，可重復性好,。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端,。

• 快速,、方便，不需要使用有毒的苯酚,、氯+#仿等試劑,，也不需要乙醇沉淀,。獲得的質(zhì)粒產(chǎn)量高、純度好,， 可以直接用于酶切,、轉化、PCR,、體外轉錄,、測序等各種分子生物學實驗。

注意事項：

• 第--次使用時,，將試劑盒所帶的全部 RNase A 加入溶液 P1 后（終濃度 100ug/ml） 于 2-8℃保存,。如果溶液 P1 中 RNase A 失活，提取的質(zhì)?？赡軙形⒘?/font> RNA 殘留,， 在溶液 P1 中補加 RNase A 即可。
• 環(huán)境溫度低時溶液 P2 中 SDS 可能會析出渾濁或者沉淀,，可在 37℃水浴加熱幾分鐘,， 即可恢復澄清，不要劇烈搖晃,，以免形成過量的泡沫,。
• 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化,、pH 值變化,。
• 本試劑盒適用菌株為 XL-1 Blue 和 DH5a 等核酸酶含量低缺陷型菌株。所用菌株為JM 系列,、HB101 等 endA 菌株或野生型菌株,，核酸酶含量豐富，應購買本公司生產(chǎn)的高純度質(zhì)粒小量快速提取試劑盒,。
• 溶液 P3 中含有刺激性化合物,，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚,、眼睛和衣服,。若沾染皮膚、眼睛時,，要用大量清水或者生理鹽水沖洗,。提取質(zhì)粒的量與細菌培養(yǎng)濃度、質(zhì)?？截悢?shù)等因素有關,。一般高拷貝質(zhì)粒，建議接種單菌落于 1.5-4.5ml 加合適抗生素的 LB 培養(yǎng)基,，過夜培養(yǎng) 14-16 個小時,，可提取出多達 20µg 的純凈質(zhì)粒,。如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于 10kb 的大質(zhì)粒,，應適當加大菌體使用量,，使用 5-10ml 過夜培養(yǎng)物，同時按比例增加 P1,、P2,、P3 的用量，其它步驟相同,。
• 得到的質(zhì)粒 DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度,。OD₂₆₀ 值為 1 相當于大約 50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶,，也可能為 2 條或者多條 DNA 條帶,，這主要是不同程度的超螺旋構象質(zhì)粒泳動位置不一造成，與提取物培養(yǎng)時間長短,、提取時操作劇烈程度等有關,。本公司產(chǎn)品正常操作情況下基本超螺旋可以超過 90%。

7. 洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA,，不影響下游酶切,、連接等反應。也可以使

用水洗脫,， 但應該確保 pH 大于 7.5,，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫質(zhì)粒

應該保存在-20℃,。質(zhì)粒DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫

（10mM Tris-HCl,，1mM EDTA,， pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應,，

使用時可以適當稀釋,。

自備試劑：無水乙醇

操作步驟：

提示：

ð 第--次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指+#定量無水乙醇，充分混勻,，加入

后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇,，以免多次加入!

ð 將 RNase A 全部加入溶液 P1 中，混勻,，每次使用后置于 2-8℃保存,。