LMH 雞肝癌細(xì)胞

Product Format: a T25 flask

Culture Properties：貼壁

Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components  

Operation steps for cell culture

• 吸走多余培養(yǎng)基,，加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,；
• 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒(méi)細(xì)胞表面,，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；
  （細(xì)胞對(duì)于消化比較敏感,，消化過(guò)度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài),，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長(zhǎng)。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落,，可以輕輕吹下時(shí)即可終止,，禁止消化到細(xì)胞*漂浮?；靹蚣?xì)胞時(shí)盡量輕柔,，不要吹出大量氣泡。）
• 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化,，輕輕吹下細(xì)胞混勻,；
• 將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清,，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),；

傳代比例: 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定,，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代,，生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min,，-20度2h,，-80過(guò)夜后液氮保存。

Tips：

• 細(xì)胞經(jīng)過(guò)運(yùn)輸后,，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞的死亡破碎形成碎片,，是正常現(xiàn)象,。貼壁細(xì)胞可以消化,，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900-1000rpm(約150g)離心3min,，棄上清,。加5ml PBS重懸細(xì)胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min,，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶,。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少,，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟,；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次,。
• 細(xì)胞生長(zhǎng)不均時(shí),，可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代,。
• 細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢時(shí)，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（超過(guò)20%）,，也可以根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),，選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

不同細(xì)胞貼壁性差異比較大,，所以消化時(shí)間差別較大,，20s-10min均有可能，具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落,，并可以輕輕吹下為準(zhǔn),，嚴(yán)禁消化到細(xì)胞*漂浮。