bEnd.3 小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

Product Format: a T25 flask

Culture Properties：貼壁

Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components  

Operation steps for cell culture

• 吸走多余培養(yǎng)基,，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞,；
• 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細(xì)胞表面,，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化,；
  （細(xì)胞對于消化比較敏感,，消化過度會嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài),，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落,，可以輕輕吹下時即可終止,，禁止消化到細(xì)胞*漂浮?；靹蚣?xì)胞時盡量輕柔,，不要吹出大量氣泡。）
• 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化,，輕輕吹下細(xì)胞混勻,；
• 將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清,，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),；

傳代比例: 不同細(xì)胞生長速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定,，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代,，生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min,，-20度2h,，-80過夜后液氮保存。

Tips：

• 細(xì)胞經(jīng)過運(yùn)輸后,，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞的死亡破碎形成碎片,，是正常現(xiàn)象,。貼壁細(xì)胞可以消化,，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900-1000rpm(約150g)離心3min,，棄上清,。加5ml PBS重懸細(xì)胞,，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶,。第二次PBS重懸是為了去除碎片,，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟,；如果碎片很多,，建議PBS多洗幾次。
• 細(xì)胞生長不均時,，可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代,。
• 細(xì)胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（不超過20%）,，也可以根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài),，選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
• 不同細(xì)胞貼壁性差異比較大,，所以消化時間差別較大,，20s-10min均有可能，具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落,，并可以輕輕吹下為準(zhǔn),，嚴(yán)禁消化到細(xì)胞*漂浮。客戶消化過度導(dǎo)致細(xì)胞死亡,、漂浮,、生長緩慢，不提供免費(fèi)售后服務(wù),。
• 干冰發(fā)貨均為兩支，客戶先復(fù)蘇一支,，若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支,。若客戶同時復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方不提供免費(fèi)售后服務(wù),。
• 細(xì)胞狀態(tài)正常時,，應(yīng)盡快凍存細(xì)胞保種，凍存后應(yīng)隨機(jī)抽取一支檢測凍存效果,。我方不對客戶凍存細(xì)胞導(dǎo)致死亡負(fù)責(zé),，客戶凍存細(xì)胞死亡不提供免費(fèi)售后服務(wù)。

Notice：

      客戶收到細(xì)胞有任何疑問請及時致電我們,，細(xì)胞收到后1周內(nèi)沒有任何電話,，或其他形式回訪，默認(rèn)為細(xì)胞質(zhì)量沒問題,，之后出了任何問題不給予免費(fèi)售后,。細(xì)胞免費(fèi)售后只提供一次,，若重發(fā)后再次培養(yǎng)死亡不再免費(fèi)補(bǔ)發(fā)，細(xì)胞收貨時已經(jīng)死亡或密度不足的除外,。