EA01C\00                     2018-01版

豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒

英文名稱：Blocking ELISA Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody test

【規(guī)格】

96T×2/盒

【用途】

用于檢測血清中豬瘟病毒抗體,，適用于對豬場豬瘟疫苗免疫狀況的評價以及感染豬的血清學診斷,。

【檢驗原理】

本試劑盒是用來檢測豬血清中豬瘟病毒抗體的試劑盒,。該試劑盒是用豬瘟病毒抗原包被的微量反應板,，利用阻斷ELISA原理來檢測豬血清中豬瘟病毒抗體,。用酶標儀在雙波長(450nm,，630nm)測定該反應體系的吸光度,。當被測樣品中含有豬瘟病毒抗體(陽性結果)時,，顯色就會變淺，當被測樣品中不含有抗豬瘟病毒抗體(陰性結果)時,，顏色就會變深,。樣本的阻斷率可以通過與陰性對照吸光度的比值來確定。

【主要組成成份】

【自備器材】

1．酶標儀：雙波長450/630nm濾光片

2．的微量移液器（單道1-100ul,、0.5-10ul,、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．洗液吸移裝置

6．一次性槍頭（10ul，200ul）

7．去離子水

【樣本要求】

本試劑檢測的樣本為豬血清或血漿,，樣本應無菌采集,，2℃～8℃貯存應不超過一周，長期應在-20℃以下保存,。

【實驗準備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前,，先取出置室溫30min，可以獲得jia結果,。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本和陰性陽性對照血清作2倍稀釋（即：60μl血清加60μl樣本稀釋液）,，混合均勻。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（即1ml濃縮洗滌液加19ml水）,，即可使用,。注意：使用前要使結晶*溶解。

【檢驗方法】

1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量,，取所需板條,，檢測時，設陰,、陽性對照各2孔,，分別加入稀釋好的陰性、陽性對照血清100μl于相應孔中,。其余為樣本孔,，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）。

2．溫育：加樣后,，蓋上蓋板膜,，置37℃溫育120分鐘。

3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應板孔,，靜置10秒,，直接甩出，洗滌3次,，后一次洗滌后在吸水紙上拍干板內(nèi)液體,。

4．加酶：每孔加酶標記物100μl。

5. 溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜,，置37℃溫育30分鐘,。

6．洗板：同步驟3。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl,，振蕩混勻,，37℃避光反應10分鐘。

8．終止：每孔加終止液50μl,，振蕩10秒,，充分混勻，終止后即讀數(shù),。

9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長檢測,，讀取各孔吸光度值（OD值）。

【結果判定】

在酶標儀上測各孔OD值,，試驗成立條件是陰性對照OD值大于1.0,，陽性對照的阻斷率均大于50％，若試驗不成立,，有可能是操作失誤造成，應重讀說明書,，再操作一次,。

S=樣品孔OD值，N=陰性對照孔平均OD值

阻斷率=(1–S/N)×100%

若被檢樣品的阻斷率小于或等于30%,，該樣品判為CSFV陰性,。

若被檢樣品的阻斷率大于或等于40%，該樣品判為CSFV陽性,。

若被檢樣品的阻斷率在30%~40%之間,，該樣品判為可疑。

【注意事項】

1．本試劑盒僅供研究使用,。

2．不要使用過期的試劑盒組分,，不要把不同批次的組分混合使用。

3．使用試劑盒之前,，一定要仔細閱讀說明書,。

4 使用前，濃縮的洗滌液應恢復至室溫（20～25℃），并搖動使沉淀溶解（hao在37℃水浴鍋中加熱5～10分鐘）,，然后用去離子水作20倍稀釋（例如：50ml的濃縮洗滌液加上950ml蒸餾水）,，混勻，稀釋好的洗滌液在2～8℃可以存放7-10日,。

5．本試劑盒應按含有傳染性材料對待,，試驗廢棄物應經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄,。

6．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應在室溫中平衡,。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存,。

7．應用微量移液器加入樣本及試劑,，并經(jīng)常校對其準確性。

8．加洗滌液時應做到滿而不溢,，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染,。

9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈,。

【儲存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存,，防止冷凍，有效期12個月,。

【生產(chǎn)日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒,。

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