姬姆薩染色液(Giemsa Stain,1:9)

姬姆薩色素(又稱吉姆薩色素)是由天青Ⅱ與伊紅混合而成,。Giemsa 染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同,，姬姆薩染色液對胞漿著色力較強(qiáng),，能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,，特別是對血液和骨髓細(xì)胞中的嗜天青,、嗜酸性,、嗜堿性顆粒,，著色清晰，但是對胞核著色偏深, 核結(jié)構(gòu)顯色不佳,，故姬姆薩染液常與瑞氏染液聯(lián)合使用,。Giemsa Stain 以進(jìn)口的姬姆薩色素、甲醇為主要原料,，含*襯染劑,，經(jīng)研磨配制而成，能呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞染色效果,，經(jīng)常用于組織切片,、血液和細(xì)胞涂片、細(xì)菌,、染色體顯帶,、原生動物寄生蟲等染色。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),，與酸性染料伊紅結(jié)合,，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì),；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色,，稱為嗜堿性物質(zhì),；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色,，稱為中性物質(zhì),。

 Giemsa Stain(1:9)由 10×儲存液和磷酸鹽緩沖液組成，1:9  混合成工作液后

使用,；亦可以分開使用,，即先用 Giemsa Stain 染色，再經(jīng)磷酸鹽緩沖液處理,，亦可以得到

滿意的染色效果,。

產(chǎn)品組成：                                                     100ml          500ml              

試劑(A): Giemsa Stain 儲存液(10×)         10ml             50ml       RT 避 光

試劑(B): 磷酸鹽緩沖液                                  100ml           500ml    RT

自備材料：

1、 載玻片,、顯微鏡

2,、 蒸餾水

3、 甲醇

4,、 0.1～0.5%乙酸

操作步驟(僅供參考)：

(一)一步法涂片染色

1,、Giemsa 工作液的配制：

按試劑(A):試劑(B)=1:9 混合，即取1份 Giemsa Stain 儲存液(10×)加入到9份的磷酸鹽緩沖液中充分混勻,，即為Giemsa 工作液,，為即用型試劑，不易保存,，即用即配,。

2、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片,，待涂片自然干燥后,，用甲醇固定 1～3min。

3,、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,，滴加 Giemsa 工作液覆蓋涂片，室溫滴染 15～ 30min,。

4,、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗。

5,、干燥,、鏡檢。

染色結(jié)果：

嗜酸性顆粒        粉紅色

嗜堿性顆粒        紫藍(lán)色

中性顆粒          淡紫色

(二)兩步法涂片染色

1,、Giemsa 工作液的配制：

按試劑(A):蒸餾水=1:4 混合,，即取1 份的Giemsa Stain儲存液(10×)加入到4 份的蒸餾水中充分混勻，即為Giemsa 工作液,。Giemsa工作液為即用型試劑,，不易保存,，即用即配,。

2,、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片,，待涂片自然干燥后,，用甲醇固定 1～3min,。

3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,，滴加適量 Giemsa 工作液覆蓋涂片,，室溫滴染10～15min,。

4、加入等量磷酸鹽緩沖液,，輕輕晃動載玻片,，室溫靜置5～10min。

5、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗,。

6、干燥,、鏡檢,。

染色結(jié)果：

嗜酸性顆粒         粉紅色

嗜堿性顆粒         紫藍(lán)色

中性顆粒           淡紫色

(三)組織切片染色

1,、Giemsa 工作液的配制：

按試劑(A):試劑(B) =1:9 混合,，即取1份Giemsa Stain 儲存液(10×)加入到9份磷酸鹽緩沖液中充分混勻,，即為Giemsa 工作液,。Giemsa 工作液為即用型試劑,，不易保存，即用即配。

2,、新鮮組織立即置于Regaud 固定液固定2天,，期間應(yīng)更換1次固定液。

3,、3%重鉻酸鉀固定1天,。

4、流水沖洗16個小時或過夜,。

5,、照常規(guī)脫水、包埋,。

6,、切片厚度約為5μm，常規(guī)脫蠟至水,。

7,、蒸餾水清洗2次，每次1min,。

8,、入含Giemsa 工作液染缸,，浸染18～24h。

9,、蒸餾水稍微清洗,。

10、0.1～0.5%乙酸洗1～2min,。

11,、自來水稍沖洗。

12,、用無水乙醇迅速脫水3次,，每次5～10s。

13,、二甲苯透明,，中性樹脂封固。

染色結(jié)果：

細(xì)胞核               藍(lán)色至紫色

細(xì)胞質(zhì)               淡藍(lán)色

嗜鉻細(xì)胞胞質(zhì)         黃綠色

結(jié)締組織             淡紅色

注意事項(xiàng)：

1,、血液涂片或骨髓涂片應(yīng)厚薄均勻,，以免影響染色效果。

2,、涂片染色中Giemsa 染色后，請勿先去除染液或直接對涂片用力沖洗,。

3,、如果染色過深或過淺，應(yīng)調(diào)整染色時間或工作液濃度,。

4,、涂片染色和組織切片染色中，pH值對染色有一定影響,，載玻片應(yīng)清潔,、無酸堿污染，以免影響染色效果,。

5,、染色液經(jīng)稀釋后液面應(yīng)金屬光澤則表示染液有染色作用，否則染色液可能失效,。

6,、組織切片染色中，染色后需用大量0.1～0.5%乙酸急速沖洗,，避免浮面沉淀物污染切片后難以洗脫,。

7、0.5%乙酸分化常用于Giemsa 組織切片染色,，如有必要亦可用于細(xì)胞涂片,，但其濃度應(yīng)適量下調(diào),。0.5%乙酸分化切片時，切片呈粉紅色即可終止,。

8,、Giemsa 組織切片染色中，無水乙醇脫水要迅速,，否則切片易褪色,。

9、涂片染色和組織切片染色中,，如需急速獲得結(jié)果,，可按Giemsa  Stain儲存液(10×):磷酸鹽緩沖液=1:1 配制 Giemsa 工作液，充分混勻,，即為快速Giemsa染色工作液,，將染色液滴加于細(xì)胞涂片或組織切片上，加熱染色,，20～30s后重新加染色液,，反復(fù) 5～10 次，其余步驟同上,。

10,、染色液可重復(fù)使用，但不能多次重復(fù),，若有沉淀物應(yīng)過濾后使用,。

11、Regaud 固定液: 按3%重鉻酸鉀:甲醛=4:1 配制,，臨用前混勻,，1～2 天后失效。

有效期：24 個月有效,。

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