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1372次堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測(cè)試劑盒說明書
規(guī)格:100T/48S 產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體 60mL×1 瓶,,4℃保存,。試劑一:液體 5mL×1 瓶,,4℃避光保存,。試劑二:液體 5mL×1 瓶,,4℃避光保存。
試劑三:液體 15mL×1 瓶,,4℃避光保存,,變成藍(lán)綠色不能使用。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體 1mL×1 支,,2μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液,,4℃保存。
AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶,,在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物,。
AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。
在堿性環(huán)境中,,AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚,;酚與 4-氨基安替比林和鐵氰HUA鉀反應(yīng)紅色亞醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收,;通過測(cè)定 510 nm 吸光度增加速率,,來計(jì)算 AKP 活性。試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板,、冰和蒸餾水,。
一、粗酶液提?。?/span>
稱取約 0.1g 組織,,加提取液 1mL 充分研磨,4℃,、10000rpm 離心 10min,,取上清液待測(cè)。血液可直接用于測(cè)定,,或者適當(dāng)稀釋后用于測(cè)定,。
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,,調(diào)節(jié)波長到 510 nm,蒸餾水調(diào)零,。
2. 試劑二置于 37℃水浴中預(yù)熱 30 min 以上,。
試劑名稱(μL) | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
蒸餾水 | - | - | 4 | - |
2μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)品 | - | - | - | 4 |
上清液 | 4 | - | - | - |
試劑一 | 40 | 40 | 40 | 40 |
試劑二 | 40 | 40 | 40 | 40 |
混勻后置于 37℃水浴中保溫 15min | ||||
試劑三 | 120 | 120 | 120 | 120 |
上清液 | - | 4 | - | - |
混勻后于 510 nm 測(cè)定吸光度,分別記為 A 測(cè)定管,、A 對(duì)照管,、A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管,。 |
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1. 按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 μmol 酚為一個(gè)酶活力單位,。
AKP/ALP (U/mg prot)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 樣]÷(Cpr×V 樣)÷T
=0.133×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷Cpr
2. 按樣本鮮重計(jì)算
活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 μmol 酚為一個(gè)酶活力單位。
AKP/ALP (U/g 鮮重)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 樣] ÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=0.133×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W
3. 按液體體積計(jì)算
活性單位定義:37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol 酚為一個(gè)酶活力單位,。
AKP/ALP (U/mL)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 樣] ÷V 樣÷T
=0.133×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)
C 標(biāo)準(zhǔn)品:2μmol/mL,;V 反總:反應(yīng)體系總體積(mL),204μL=0.204mL,; V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積(mL),,0.004mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),,15 min,;V 提取:加入提取液體積,,1mL,; W:樣本鮮重,g,;Cpr:樣本蛋白濃度,,mg/mL。
1,、 試劑一,、試劑二和試劑三均需避光保存。
2,、 試劑三變藍(lán)綠色后不能再使用,。
3、 加入試劑三后必須立即混勻,,否則顯色不*,。
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