目錄:北京索萊寶科技有限公司>>細胞相關(guān)產(chǎn)品>>細胞因子>> SEKH-0032人白細胞介素21（IL-21）ELISA試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | SEKH-0032 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
| 主要用途 | 人白介素21含量測定 |
人白細胞介素21(IL-21)ELISA試劑盒
注意事項：
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,，請不要使用過期的試劑,。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復溶但未用完的標準品,，請丟棄,。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30min,，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品,。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測,，且加入試劑的順序應(yīng)保持*,。
5. 為避免交叉污染,，請在試驗中使用 1 次性試管,，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器,。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,，使用前請離心處理（5-10 S 即可）,，使管壁上的液體集中在管底部，取用時,，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分,。
8. 為保證結(jié)果準確，每次檢測均需做標準曲線,。
安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液,，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,，如果不慎接觸,，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時,，請按國家生物實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行,。
試劑盒組成及儲存：
自備實驗器材（不提供，可代購）
1． 酶標儀（主波長 450nm,，參考波長 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水,，去離子水，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管
人白細胞介素21(IL-21)ELISA試劑盒
樣本收集及儲存：
1. 細胞培養(yǎng)上清：
將細胞培養(yǎng)基移無菌離心管,，在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，避免反復凍融。
2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，保存過程中如有沉淀,，請再次離心,，避免反復凍融。
3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中,，根據(jù)標本的實際要求選擇 EDTA,，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融,。
※注意：血清血漿樣本避免使用溶血,、高血脂樣本，以免影響檢測結(jié)果,；如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的值,，請將樣品做適當倍數(shù)稀釋后檢測，建議正式實驗前做預(yù)實驗以確定稀釋倍數(shù),。
試劑準備：
1. 試劑回溫：先在實驗前 30 min 將試劑盒,，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,，請放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解,。
2. 配制洗滌液：預(yù)先計算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應(yīng)用液,，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存,。
3. 標準品梯度稀釋：加入標準品/樣本稀釋液（SR1）1ml凍干標準品中，靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為2000pg/ml),，然后按照以下濃度進行2倍稀釋： 2000,、1000、500,、250,、125、62.5、31.25,、pg/ml進行稀釋,，2000pg/ml為標準曲線點濃度，標準品/樣本稀釋液（SR1）作為標準曲線的零點
（0pg/ml）,。復溶過的標準品原液（2000pg/ml）未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,，并將其貯存在-20～-80℃冰箱，具體如下圖,。
4. 生物素化抗體工作液：預(yù)先計算好試驗所需用量,，用檢測稀釋液（SR2）將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應(yīng)用工作液（稀釋前充分混勻），請在30分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中,。
5. 酶結(jié)合物工作液：按每次試驗所需用量配制,，用酶結(jié)合物稀釋液（SR3）將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1倍應(yīng)用工作液（稀釋前離心），請在30分鐘內(nèi)使用,。
6. 洗滌方法：
? 自動洗板：甩盡酶標板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干，注入洗滌液為 300ul/孔,，注與吸出間隔為 30 秒,，洗板 5 次。
? 手工洗板：甩盡酶標板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干,，用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,，靜止30 秒后甩凈酶標板孔中液體,，在厚迭的吸水紙上拍干，洗板 5 次,。
檢測步驟：
Human IL-21 ELISA KIT結(jié)果判斷：
1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值,。選擇雙波長檢測，參考波長為 630 nm,。如不能進行雙波長檢測,，請用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值。
2.計算標準品,、樣品的平均 OD 值：每個標準品和標本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值,。
3.以標準品濃度為橫坐標，吸光度OD值為縱坐標,，用軟件繪制標準曲線,，樣品中IL-21含量可通過對應(yīng)OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。
4.若標本 OD 值高于標準曲線上限,，應(yīng)做適當稀釋后重新檢測,，計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。
參數(shù)表征：
1. 數(shù)據(jù)及標準曲線
本圖僅供參考,，應(yīng)以當次試驗標準品繪制的標準曲線計算人 IL-21 的樣本含量,。
2. 靈敏度：
低可檢測人 IL-21 濃度達 15pg/ml,，
20 個零標準品濃度 OD 的平均值加上兩個標準差，計算相應(yīng)的可檢測濃度,。
3. 特異性：
不與人 IFN-γ,、IL-1β、IL-2,、IL-4,、IL-17A、IL-18,、IL-22,、IL-23、TGF-β1,、TNF-α
小鼠 IFN-γ,、IL-1β、IL-2,、IL-4,、IL-6、IL-10,、IL-17A,、TNF-α等反應(yīng)。
4. 重復性：
板內(nèi),，板間變異系數(shù)<10%,。
5. 回收率：
在選取的健康人血漿、細胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的人 IL-21,，計算回收率,。
6. 線性稀釋：
分別在選取的 4 份健康人血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度人 IL-21，在標準曲線動力學范圍內(nèi)進行稀釋,，評估線性,。
人白細胞介素21常見問題及解決方法：
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