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硅基質(zhì)材料吸附DNA 質(zhì)粒大量提取試劑盒
貨號：D1110
規(guī)格：10T
保存：常溫保存,，復(fù)檢期一年,。
產(chǎn)品說明：
本試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)胞,，通過吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的特性提取質(zhì)粒DNA。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效,、專一地吸附DNA,，可大限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物,。從50-100ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中,，可快速提取200-300μg純凈地高拷貝質(zhì)粒DNA，提取率達(dá)85-90％,。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)的分子生物學(xué)試驗(yàn),，包括酶切、PCR,、測序,、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。本試劑盒無需使用酚等有毒試劑,，操作安全,。
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽,。溶液Ⅰ在使用
前先加入 RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入）,，混勻，置于 2-8℃保存,。如非指明,，所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。
操作步驟:
1. 收集 50-100ml 過一夜培養(yǎng)的菌液 11000rpm 離心 10 分鐘,，盡量吸除上清(菌液較多時(shí)可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中),。
2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入 5ml 溶液Ⅰ (請先檢查是否已加入 RNaseA) ，使用移液器或渦旋振蕩器*懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀,。注意：如果菌塊未*混勻,，會影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。
3. 向離心管中加入 5ml 溶液Ⅱ ,，溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次使菌體充分裂解,。 注意：①翻轉(zhuǎn)一定要溫和，以免污染細(xì)菌基因組 DNA,。②作用時(shí)間不要超過 5 分鐘,，以免質(zhì)粒受到破壞。
4. 向離心管中加入 7ml 溶液Ⅲ ,，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次,，充分混勻，此時(shí)會出現(xiàn)白色絮狀沉淀(如菌液過多,，可在此步放置 5 分鐘,，以盡可能的降解 RNA),。11000rpm 離心 10 分鐘，用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個干凈的離心管中,，注意盡量不要吸出沉淀,。
注意：溶液Ⅲ加入后應(yīng)立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀,。 如果上清中還有微小白色沉淀,，可再次離心后取上清。
5. 將上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱放入收集管中),，室溫放置 2-3 分鐘,，11000rpm 離心 30-60 秒，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中(如為提高得率,，可將收集管中的液體加入吸附柱再次吸附一次)。
6. 向吸附柱中加入 8ml 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),，11000rpm 離心 2min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。
7. 向吸附柱中加入 6ml 漂洗液,，11000rpm 離心 2min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中,。
8. 11000rpm 離心 5min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘,，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會影晌后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等,。
9. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,，向吸附膜中央懸空滴加 1-2ml 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置 5min,，11000rpm 離心 2min,，收集質(zhì)粒溶液用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
10. 為了增加質(zhì)粒的回收效率,，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,，室溫放置 5min， 11000rpm 離心 2min,。
產(chǎn)品包裝：
注意事項(xiàng)：
1,、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA全部加入)，混勻，置于2-8℃保存,。
2,、*次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在漂洗液中加入無水乙醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇)。
3,、使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,，如有混濁現(xiàn)象可在37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復(fù)澄清后再使用,。
4,、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子,，如非指明,，所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)室溫下進(jìn)行離心,。
5,、如果是提取革蘭氏陽性菌質(zhì)粒，必須在裂解細(xì)胞前破細(xì)胞壁,，方法如下：收集適量菌體,，加入5ml溶液Ⅰ，充分懸浮菌體,，加入溶菌酶終濃度為10-20mg/ml,，37℃處理30min左右。加入溶菌酶的濃度和處理時(shí)間可根據(jù)不同的菌株和具體試驗(yàn)條件進(jìn)行調(diào)整,。
6,、洗脫緩沖液的體積好不少于1ml，體積過小會影響回收效率,；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,，若需要用水做洗脫液
應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍)，pH值低于7.0會降低洗脫效率,。
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硅基質(zhì)材料吸附DNA 質(zhì)粒大量提取試劑盒訂購說明：
1,、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨,。
2,、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂,，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂,。
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會因貨期,、批次等因素發(fā)生變化,，若有變動以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,，部分城市可到17點(diǎn)整,，因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5,、請辦理完貨款后,，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址,、姓名,、等以傳真、,、短信,、等形式通知我們。
運(yùn)輸說明：
1,、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸,。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封,，膠帶層層粘住泡沫盒,，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中,，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,。
2,、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,，再使用泡沫盒密封,，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周）,，然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝,。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。
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