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果膠酯酶（PE）活性檢測試劑盒說明書

NaOH滴定法

貨號：BC2700

規(guī)格：50T/48S、100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

50T溶液的配制：

1、 提取液：臨用前加入100mL蒸餾水,，充分溶解,；用不完的試劑4℃避光可保存3個月；

2,、 試劑一：臨用前加入100mL蒸餾水,，磁力攪拌50℃加熱溶解3小時左右至全溶解，轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶,，蒸餾水定容至250mL；用不完的試劑4℃可保存8周,；（因試劑一較難配制,，建議客戶提前制備）

3、 試劑三工作液：臨用前根據(jù)樣本量取出部分試劑三,，用蒸餾水稀釋16倍得到試劑三工作液備用,，現(xiàn)配現(xiàn)用，用不完的試劑4℃可保存1周,；

100T溶液的配制：

1,、 提取液：臨用前取1瓶加入100 mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑4℃避光可保存3個月,；

2,、 試劑一：臨用前加入100mL蒸餾水，磁力攪拌50℃加熱溶解3小時左右至全溶解,，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶,，蒸餾水定容至500mL；用不完的試劑4℃可保存8周,；（因試劑一較難配制,，建議客戶提前制備）

3、 試劑三工作液：臨用前根據(jù)樣本量取出部分試劑三,，用蒸餾水稀釋16倍得到試劑三工作液備用,，現(xiàn)配現(xiàn)用，用不完的試劑4℃可保存1周,；

產(chǎn)品說明：

果膠酯酶（Pectinesterase,，PE），又稱果膠甲基酯酶,、果膠氧化酶,，廣泛存在于植物及微生物中。果膠是構(gòu)成植物細胞壁的主要成分之一,，而果膠酯酶催化果膠的甲氧酯水解產(chǎn)生果膠酸和甲醇,，在植物果實成熟的細胞壁代謝過程中發(fā)揮著重要作用，在食品工業(yè)中具有極其重要的作用和開發(fā)前景,。

果膠酯酶催化果膠水解的過程中釋放H⁺,，反應(yīng)體系pH值降低，通過加入堿液維持反應(yīng)體系pH始終維持在7.8維持pH所消耗的堿液量可反映果膠酯酶的活性,。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果試劑三工作液消耗量過大或過小，建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。

需自備的儀器和用品：

低溫離心機,、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器,、天平,、研缽/勻漿器、10mL離心管或試管,、容量瓶,、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一,、樣本處理

1,、將研缽/勻漿器與提取液置于冰上或4℃預(yù)冷10min,。

2、按照樣本質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）=1:3~5的比例（建議稱取約0.5g樣本,，加入1.5mL提取液）加入提取液,，冰浴勻漿后，于4℃,，12000g離心10min,，棄沉淀，取全部上清液置于冰上待測,。

二,、測定步驟

1、 將試劑一置于37℃水浴鍋中保溫10min以上,。

2,、 依次在10mL離心管或試管中加入1mL上清液、25μL試劑二和4mL試劑一,，充分混勻,，用試劑三工作液調(diào)節(jié)pH至7.8（粉紅色）。

3,、 將上述離心管或試管置于37℃恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋中準(zhǔn)確反應(yīng)60min,，每隔20min用試劑三工作液調(diào)節(jié)pH，使其維持在7.8（粉紅色）,，并記錄下所消耗試劑三工作液的體積,，記為V（mL）。

三,、果膠酯酶活性計算

酶活單位定義：每g組織樣本每分鐘消耗1μmol NaOH的量為一個酶活力單位,。

PE活性（U/g 質(zhì)量）=25×V÷V上清×V提÷W÷T×F=1.25×V×F

V：消耗試劑三工作液的體積，mL,；V上清：加入的上清液體積,，1mL；V提：加入的提取液體積,，1.5mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；T：反應(yīng)時間,，60min；F：稀釋倍數(shù),。

注意事項：

1、 實驗中酶促反應(yīng)產(chǎn)生H⁺,，此時溶液無色透明,，需用試劑三調(diào)節(jié)pH到7.8（粉紅色）,，即溶液會從無色透明突然變?yōu)榉奂t色。

2,、 建議正式實驗前進行預(yù)實驗,，其中測定步驟2中，將樣本上清液,、加入試劑二和試劑一混勻后,，用試劑三工作液調(diào)節(jié)pH至7.8（粉紅色）時，可適當(dāng)調(diào)整每次加入試劑三工作液的體積,，防止pH調(diào)過,。

3、 若樣本酶活性較高,，可適當(dāng)稀釋樣本上清液后再進行測定,，計算酶活時乘以稀釋倍數(shù)即可。若樣本酶活性較低,，建議客戶加大樣本量后重新進行測定,，注意同步修改計算公式。

實驗實例：

1. 稱取0.51g蘋果果肉加入1.5mL提取液進行冰浴勻漿,，取1mL上清液于10mL離心管中按照測定步驟操作,，最終計得調(diào)節(jié)pH所消耗試劑三工作液總體積為0.76mL，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

PE活性（U/g 質(zhì)量）=25×V÷V上清×V提÷W÷T=0.93 U/g 質(zhì)量,。

相關(guān)系列產(chǎn)品：

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BC2630/BC2635  果膠酶活性檢測試劑盒

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果膠酯酶檢測試劑盒 常量法 果膠酯酶檢測試劑盒 常量法