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L-半乳糖酸-1,4-內(nèi)酯脫氫酶（Gal LDH）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC1250
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入40 mL蒸餾水,，充分溶解,；

2. 試劑二：臨用前加入5 mL蒸餾水，充分溶解,。

產(chǎn)品說明：
L-半乳糖途徑是合成AsA的主要途徑,。Gal LDH位于線粒體內(nèi)膜，負(fù)責(zé)催化植物體內(nèi)AsA生物合成的最后一步,，也是該途徑的關(guān)鍵酶之一,，對植物體內(nèi)AsA含量的積累起著至關(guān)重要的作用。
Gal LDH催化L-半乳糖內(nèi)酯還原氧化型細(xì)胞*素c（Cyt c）,，還原型Cyt c在550nm有吸收峰,；測定還原型Cyt c增加速率,，來計(jì)算Gal LDH活性,。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測,。
需自備的儀器和用品：
臺式離心機(jī),、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿,、可調(diào)式移液器,、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水,。
操作步驟：
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
稱取約0.1g樣本,，加提取液1mL,，冰上充分研磨，13000g 4℃離心10min,，取上清液置冰上待測,。
二、測定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min,，調(diào)節(jié)波長到550nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 按樣本數(shù)取出一定量的試劑一在25℃水浴鍋中預(yù)熱30min以上,，其余的分裝保存(-20℃)。

3. 空白管：依次在1mL比色皿中加入100μL蒸餾水,、800μL預(yù)熱的試劑一和100μL試劑二,，迅速混勻后于550nm比色，記錄10s和130s的吸光值,，分別為A1,，A2，ΔA空白管=A2-A1,。

4. 測定管：依次在1mL比色皿中加入100μL上清液,、800μL預(yù)熱的試劑一和100μL試劑二，迅速混勻后于550nm比色,，記錄10s和130s的吸光值,，分別為A3，A4,，ΔA測定管=A4-A3,。

三、Gal LDH活性計(jì)算
（1）按蛋白濃度計(jì)算
Gal LDH活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘還原1μmol Cyt c為1個(gè)酶活單位,。


Gal LDH (U/mg prot) = [(ΔA測定管-ΔA空白管)÷ε÷d×V反總×10⁶]÷（Cpr×V樣）÷T
=0.289×(ΔA測定管-ΔA空白管) ÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
Gal LDH活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘還原1μmol Cyt c為1個(gè)酶活單位,。
Gal LDH（U/g 質(zhì)量）=[(ΔA測定管-ΔA空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶]÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=0.289×(ΔA測定管-ΔA空白管) ÷W
ε：還原型Cyt c摩爾消光系數(shù),，17.3×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V反總：反應(yīng)體系總體積，1mL=0.001L,；10⁶：單位換算系數(shù),，1mol=1×10⁶μmol；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積,，100μL=0.1mL,；V樣總：提取液體積，1mL,；Cpr：上清液蛋白濃度,，mg/mL，蛋白質(zhì)濃度需要另外測定,；W：樣本質(zhì)量,，g；T：反應(yīng)時(shí)間,，2min,。
注意事項(xiàng)：
1、在測定酶活時(shí)要注意溫度,。建議取小燒杯一只裝入一定量的25℃蒸餾水,，將此燒杯放入25℃水浴鍋中，在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中,。
2,、建議兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色,，一個(gè)人計(jì)時(shí),，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3,、加入最后一種試劑后需迅速混勻并測定OD值,。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g獼猴桃加入1mL提取液冰上充分研磨，13000g 4℃離心10min,，取上清液置冰上,，按照測定步驟操作，測得計(jì)算ΔA測定管=A4-A3=0.881-0.784=0.097,，ΔA空白管=A2-A1=0,，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

Gal LDH（U/g 質(zhì)量）=0.289×(ΔA測定管-ΔA空白管) ÷W=0.2803 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC1230/BC1235 抗壞血酸（AsA）含量檢測試劑盒
BC1240/BC1245 脫氫抗壞血酸（DHA）含量檢測試劑盒
BC0650/BC0655 單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）活性檢測試劑盒

L-半乳糖酸-1,4-內(nèi)酯脫氫酶試劑盒 維生素C L-半乳糖酸-1,4-內(nèi)酯脫氫酶試劑盒 維生素C