目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>其它系列>> BC4370-50T/24S植物中酰脲含量檢測試劑盒 其他系列
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/24S |
| 貨號(hào) | BC4370 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 植物中酰脲含量檢測 |
植物中酰脲含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號(hào)：BC4370
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員,。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液A液 | 液體30 mL×1瓶（自備） | 常溫保存 |
提取液B液 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 粉劑×2瓶 | -20℃保存 |
試劑六 | 液體50 mL×1瓶（自備） | 常溫保存 |
試劑七 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1,、提取液A液：自備無水乙醇；
2,、試劑五：臨用前取1瓶加入5 mL蒸餾水溶解備用,，可分裝后-20℃保存，-20℃保存一周,；
3,、試劑六：自備濃鹽酸；
4,、標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg尿*素,。臨用前加入632.5 μL蒸餾水配制成100 μmol/mL酰脲標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明：
選育高固氮活性豆科植物品種是提高豆科植物固氮能力的一個(gè)有效途徑,。豆科植物根瘤菌固氮的最初輸出產(chǎn)物主要是酰脲（尿*素和尿囊酸）,。酰脲是豆科植物一根瘤菌共生固氮中的氮代謝產(chǎn)物，是氮素貯藏和運(yùn)輸?shù)闹饕问?，在豆科植物氮代謝中起著重要作用,。可通過測定豆科植物組織中酰脲的含量,，從而評估其固氮能力,。
尿*素在過酸或堿條件下水解產(chǎn)生乙醛酸，然后在*和強(qiáng)酸條件下可被氧化,，生成紅色絡(luò)合物,，在535 nm處有特殊吸收峰，據(jù)此可由吸光值計(jì)算出樣本中酰脲的含量,。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、鼓風(fēng)烘箱,、1 mL玻璃比色皿,、可調(diào)式移液槍、30~50目篩,、研缽,、冰和蒸餾水,、無水乙醇、濃鹽酸和EP管,。
操作步驟：
一,、 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)
植物樣本：將供試的植物樣本在65℃的鼓風(fēng)烘箱中烘干,，研磨成粉狀,，過30~50目篩。按質(zhì)量（g）︰提取液體積（mL）1︰10~20比例（建議稱取0.1 g烘干樣本,，依次加入1.0 mL提取液A與1.0 mL提取液B,，禁止將提取液A與提取液B混勻待用），漩渦混勻,，在80℃水浴鍋中萃取5 min,，然后3500 rpm，室溫,，離心15 min,，棄沉淀，取上清液置于冰上待測,。
二,、測定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上,，調(diào)節(jié)波長至535 nm，蒸餾水調(diào)零,。
2,、 將試劑六與試劑七置于冰水浴中預(yù)冷30 min以上，并置于冰上待用,。
3,、 標(biāo)準(zhǔn)液的處理：將標(biāo)準(zhǔn)品配制成100 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液后，用蒸餾水稀釋至12.5,、6.25,、3.125、1.5625,、0.78125 nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用,。
4、 操作表：（在1.5mL EP管中操作）
對照管 | 尿囊酸測定管 | 酰脲測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
樣本（µL） | 400 | 400 | 400 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液（µL） | - | - | - | 400 | - |
蒸餾水（µL） | - | - | - | - | 400 |
試劑一 （µL） | 50 | - | 50 | 50 | 50 |
試劑三（µL） | - | 100 | - | - | - |
- | 充分混勻,，沸水浴7 min,，冷卻至室溫。 | ||||
試劑二（µL） | 50 | - | 50 | 50 | 50 |
- | 充分混勻,，100℃水浴加熱6 min,，冷卻至室溫 | ||||
試劑四（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
試劑五（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
充分混勻,，室溫下靜置6 min，然后轉(zhuǎn)移至冰水浴中,，冷卻至4℃ | |||||
試劑六（µL） | 500 | 500 | 500 | 500 | 500 |
試劑七（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
充分混勻,，室溫下靜置15 min | |||||
取1 mL反應(yīng)液，于1 mL玻璃比色皿中測定535 nm處吸光值A,，分別記為A對照管,、A尿囊酸測定管、A酰脲測定管,、A標(biāo)準(zhǔn)管及A空白管,。計(jì)算ΔA尿囊酸=A尿囊酸測定管-A對照管，ΔA酰脲=A酰脲測定管-A對照管,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管,。 | |||||
注意：對照管不進(jìn)行水浴加熱處理；尿囊酸測定管只需進(jìn)行第二次的沸水??；測定管、標(biāo)準(zhǔn)管及空白管在沸水浴加熱時(shí),，EP管蓋緊并用封口膜密封,，避免液體蒸發(fā)影響試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
三,、植物中酰脲含量的計(jì)算
1,、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，其對應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y= kx+b，將ΔA尿囊酸和ΔA酰脲分別帶入方程得到x1（nmol/mL）和x2（nmol/mL）,。
2,、 豆科植物中酰脲含量的計(jì)算：
尿囊酸含量（nmol/g 質(zhì)量）= x1×V提取÷W=2×x1÷W
酰脲含量（nmol/g 質(zhì)量）= x2×V提取÷W=2×x2÷W
V提取：加入提取液體積,，2.0 mL,；W：樣本質(zhì)量，g,。
注意事項(xiàng)：
1,、同一批檢測樣本需配1-2個(gè)空白管。
2,、當(dāng)OD值高于0.9時(shí),，建議將樣本稀釋后檢測，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù),。
3,、試劑六與試劑七在使用之前請先置于冰上預(yù)冷30 min以上,。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、取0.1g馬齒莧,，進(jìn)行樣本處理,，按照測定步驟操作，測定計(jì)算ΔA酰脲=A酰脲測定管-A對照管=0.559-0.385=0.174,，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0708x+0.0059,，計(jì)算x2=2.3743，按照計(jì)算公式計(jì)算得：
酰脲含量（nmol/g 質(zhì)量）= x2×V提取÷W=2×x2÷W=2×2.3478÷0.1=47.486 nmol/g 質(zhì)量,。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
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BC1480/BC1485 水土中亞硝酸鹽含量檢測試劑盒
植物中酰脲含量檢測試劑盒 其他系列 植物中酰脲含量檢測試劑盒 其他系列
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